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  • 五色多重荧光免疫组化染色试剂盒(抗兔二抗)
    货号: abs50029
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    abs50029-20T 现货 ¥5890.00
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    abs50029-100T 现货 ¥22410.00
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    概述
    描述
    组织微环境中有复杂的细胞组成,这些细胞的表型、状态、丰度、分布都有着重要的生物学意义和临床价值。借助抗体染色可以将其在组织原位上呈现出来。免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术,常规IHC检测只能展示单一指标,难以呈现复杂的组织微环境中的细胞组成、状态和关系,而这些信息对疾病的诊断和治疗至关重要!
    酪氨信号放大技术原理:类似常规免疫组化的DAB显色方法,TSA技术同样采用HRP标记的二抗,HRP催化加入体系的荧光素底物,生产活化荧光底物,活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合,使样品上稳定的共价结合荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的抗体,在换下一种一抗来第二轮孵育,换另一种荧光素底物,如此往复就可实现多重标记。
    检验原理
    多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理,选用辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗抗体,对试剂盒中的荧光染料进行活化,将信号共价结合到抗原上。借助于不同的荧光染料标记,通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。
    产品组成
    TSA单色荧光染料520、TSA单色荧光染料570、TSA单色荧光染料620、TSA单色荧光染料700、信号放大反应液、抗兔HRP标记二抗、抗荧光淬灭封片剂、DAPI.
    应用
    主要用于人源或小鼠组织、石蜡切片、TMA芯片的免疫组化染色。
    使用方法
    1.荧光染料的稀释:若染料为干粉,使用100ulDMSO溶解,制成100X染料母液;若染料为液态表示出厂即为DMSO溶解的100X母液;使用信号放大反应液按1:100稀释制备染料工作液(现用现配);DAPI使用无菌水按1:100稀释制备工作液。 2.二抗的使用:试剂盒为抗兔二抗,适用小鼠组织,实验前请核实一抗种属是否匹配。人源样本请参考(#abs50013)。
    性能
    储存/保存方法
    荧光染料需避光保存,2~8℃储存,收到货起有效期为12个月。
    注意事项
    1. 本试剂盒只用于免疫组化,不做其他用途。
    2. 本试剂盒仅限于专业人员使用。
    3. 应采用适当的防护措施,以避免试剂同皮肤和眼睛接触。
    4. 超过有效期的试剂活性可能降低,因此不得使用超过有效期的试剂。
    5. 若将本试剂盒的染色组分与其他公司的产品混合使用,在染色过程中可能出现异常情况。
    6. 脱蜡不彻底,容易影响染色效果。
    7. 为了防止可能出现的假阴性、假阳性结果,实验过程中需有阳性对照及阴性对照同时进行。
    8. 使用本试剂盒中所产生的各种废弃物都应按照《医疗废物管理条例》进行处理。
    参考文献
    参考文献
    1.Dabbs David J. 诊断免疫组织化学(M). 北京:北京大学医学出版社,2008.9.
    2.【美】Ed Harlow, David Lane. 抗体技术指南(M). 北京:科学出版社,2002:79-80,105.
    3.Stack, E. C., et al., Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods, 2014 70 (1): 46-58.
    4.钱帮国. 焦磊. 多标记免疫荧光染色及多普成像技术在组织学研究中的应用. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2017 (4): 373-382.
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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      • 样本可以做成冰冻切片吗?
      • 可以的。抗原修复步骤不推荐用加热的方法,推荐用抗体洗脱液(abs994)
      • 所有操作要避光吗?
      • 不需要,在常规环境下操作就可以,染料的荧光强度很高。
      • 抗体修复液每一轮修复都要更换吗?
      • 是的,每一轮都要根据抗体选择相应的修复液。
      • 染料的选择会影响后染色吗,有共定位的话怎么办?
      • 共定位的情况,我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况,染料不会对染色有影响,串色的情况需要预实验做充足,包括抗体稀释比例,染料与放大液比例,修复条件的确定。
      • 多色用的一二抗各是什么种属?
      • 多色的优势在于一二抗种属无需特别要求,一抗根据样本种属选择既可,二抗根据一抗选择即可,多个抗体组合,种属不会有影响。
      • 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好?
      • 微波修复洗脱更稳定,抗体洗脱液对大多数抗体都管用,难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦!
      • 实验用时真的一天能做完吗?
      • 相比普通的组织荧光实验,我们一抗的孵育时间只需室温30min,二抗和信号放大步骤只需孵育10min,能大大节约时间,五色左右可在一天内做完。
      • 多色样本的寄送有条件限制吗?
      • 正常的石蜡切片和组织芯片很稳定,只要防震盒常温运输即可,冰冻切片的话,需要干冰低温运输。
      • 我的组织还有GFP蛋白,给结果的时候能排除干扰吗?
      • 可以的,结果分析的时候可以避免绿色通道,分析软件赋予的颜色是伪彩色,可以更换其他颜色。

      • 我这边提供抗体的话,抗体需要满足什么条件吗?
      • 抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用,各品牌供应商都会提供相应的实验验证的,爱必信组化抗体经过严格实验验证,是不错的选择。

      • 如果我能提供抗体给你们做服务的话,需要的抗体量是多少?
      • 需要的抗体量要根据样本数来,但一般来讲,50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。

      • 在指标与染料的搭配以及染色顺序上,有什么规律吗?
      • 并没有一个特别的线性关系,和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系,所以会多因素考虑,多尝试,预实验很重要。
      • TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤,但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有?
      • 试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。

      • B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗?
      • T细胞:CD3、CD4、CD8、FoxP3(再细化还有:GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45)
        B细胞:CD19 ;
        DC细胞:CD8α、CD11b

      • 荧光染料激发光和发射光波长分别是多少?
      • 染料名称

        保存温度

        波长

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        激发波长

        发射波长

        DAPI

        -20℃

        360

        461

        DAPI

        TSA单色荧光染料520

        490

        520

        FITC/AF488/Opal520

        TSA单色荧光染料540

        520

        540

        AF514/Opal540

        TSA单色荧光染料570

        550

        570

        CY3/AF555/Opal570

        TSA单色荧光染料620

        590

        620

        AF594/Opal620

        TSA单色荧光染料650

        640

        660

        AF610/Opal650

        TSA单色荧光染料670

        650

        670

        APC/CY5/AF647/Opal670

        TSA单色荧光染料690

        660

        690

        AF660/CY5.5

        TSA单色荧光染料700

        682

        702

        AF680/CY5.5/Opal690

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