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细胞培养小分子药物配制方法解析

时间:2023-03-24 点击次数:1002

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科研实验中我们经常需要配制各种浓度的试剂。例如细胞实验一般需要加入小分子激动剂/抑制剂;分子转化实验一般会加入抗生素;免疫实验需要加入免疫刺激物/免疫佐剂等。这些昂贵的试剂浓度一旦计算错误,不仅挑灯夜战得来的数据毁于一旦,早日发文的愿望也随之破灭,可谓一失足成千古恨。今天小爱就为大家解决这一难题,让我们学会快速换算试剂浓度,摆脱科研失误。

案例一

抑制剂储存液配制

 

我们买来的小分子抑制剂一般是冻干粉,需要把它配制成溶液。首先,我们应该知道药物的分子量、溶解度以及规格。如果是毫克级小包装,一般不需要称量分装,直接在原瓶中溶解配成储存液。

以ROCK抑制剂Y-27632为例,产品信息如下:

CAS号

规格

分子量

  可溶性/溶解性

146986-50-7

5mg

247.34

DMSO:≥ 32mg/mL (129.38mM)

 

该药物推荐溶剂DMSO,同时,最大只能配成129.38mM的储存液。这一点非常重要。有些人没有注意药物溶解性,直接在非水溶性药物中加入PBS配置,结果药物不溶,“损失惨重”。


假如我们需要配置10mM储存液,计算公式如下:

   质量(mg)= 浓度(mM)x 体积(L)x 分子量  (1)
5(mg)= 10(mM)x ?(L)x 247.34

 

即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO,即可配制成10mM溶液。(注:此处要预估原瓶的容量,如果原瓶容量小于2 mL,应考虑配置更大浓度的储存液,如20mM,加入1.01 mL DMSO)。

此外,我们也会经常遇到质量浓度和摩尔浓度单位转换,同样以10mM Y-27632为例:

10mM=10mmol/L,化合物分子量为247.34,即247.34g/mol=247.34mg/mmol

10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL

即10mM Y-27632溶液相当于2.4734mg/mL

浓度快速换算法则

1)mM转换mg/mL,摩尔浓度数值乘以分子量再除以1000;
2)mg/mL转换mM,质量浓度数值除以分子量再乘以1000。

案例二

抑制剂储存液稀释

 

我们买来抑制剂的冻干粉,配制储存液的浓度为10mM,如果需要使用终浓度为25uM进行细胞实验,需要加入多少抑制剂储存液呢?记住下面这个稀释公式就可以了:

起始浓度 x 起始体积 = 最终浓度 x 最终体积

   C1(mM) x V1(mL)= C2(mM)x V2(mL) (2)


首先,注意单位,我们假设最终体积为2mL,代入公式:

10(mM)x V1(mL)= 0.025(mM)x 2(mL)

即我们需要吸取5uL的储存液进行实验操作。

案例三

百分比浓度换算

 

我们在使用二硫苏糖醇(DTT)做实验时,会遇到这样的问题:已发表的文献中使用0.1%的DTT溶液,而你购买的DTT为1mol/L的储存液,那么这该如何换算呢?请听小爱为您解答:

DTT的分子量为154,即154g/mol,储存液换算成质量浓度C1为
154g/mol x 1mol/L = 154g/L

假设需配制1L的0.1%DTT溶液,即V2 = 1L = 1000mL

0.1% DTT溶液为0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L,即C2 = 1g/L

再使用公式(2)C1 x V1 = C2 x V2 可得:
154(g/L)x V1(L)= 1(g/L)x 1(L)

 

V1 = 6.5mL,即吸取6.5mL 1mol/L的DTT储存液,加入993.5mL稀释液中即可获得0.1%的DTT溶液。

如果我们购买的是固体二硫苏糖醇,配制0.1%的DTT溶液方法如下:精确称取1g二硫苏糖醇,用水定容至1000mL即可。

 

DL-二硫苏糖醇科普

DL-二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)具有很强的还原性,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。DTT有抗氧化作用,它能保护酶分子上的还原性基团,维持还原性环境,稳定酶的活性。DTT中还含有一定RNA酶抑制剂,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巯基乙醇相似的作用,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。用作蛋白质巯基保护剂和蛋白质二硫键的裂解和顺序分析。

 

DL-二硫苏糖醇应用:

※ 作为牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的还原和烷基化反应物之一;

※ 作为精子去膜和再激活培养基的一个组分;

※ 因硫醇可有效保护生物催化剂的活性位点而维持酶的稳定性;

※ 作为还原剂用于测试N-乙基马来酰亚胺与巯基反应的特异性。

 

产品信息:

货号

产品名称

规格

货期

abs9226

DTT溶液(1mol/L)

5mL

现货

abs47002083

DL-二硫苏糖醇(>98%,BR级)

5g/25g

现货

abs42017588

DL-二硫苏糖醇(>97%)

1g/5g

现货


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温馨提示:Absin所有产品仅用于科学研究,请勿药物、家用或其他用途。


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