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  • 六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔通用二抗)
  • 货号: abs50014
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs50014-20T 1-2周 ¥5678.00
    - +
    abs50014-100T 1-2周 ¥19872.00
    - +
    大包装询价
    概述
    描述
    组织微环境中有复杂的细胞组成,这些细胞的表型、状态、丰度、分布都有着重要的生物学意义和临床价值。借助抗体染色可以将其在组织原位上呈现出来。免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术,常规IHC检测只能展示单一指标,难以呈现复杂的组织微环境中的细胞组成、状态和关系,而这些信息对疾病的诊断和治疗至关重要!
    酪氨信号放大技术原理:类似常规免疫组化的DAB显色方法,TSA技术同样采用HRP标记的二抗,HRP催化加入体系的荧光素底物,生产活化荧光底物,活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合,使样品上稳定的共价结合荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的抗体,在换下一种一抗来第二轮孵育,换另一种荧光素底物,如此往复就可实现多重标记。
    检验原理
    多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理,选用辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗抗体,对试剂盒中的荧光染料进行活化,将信号共价结合到抗原上。借助于不同的荧光染料标记,通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。
    产品组成
    TSA单色荧光染料520、TSA单色荧光染料570、TSA单色荧光染料620、TSA单色荧光染料650、TSA单色荧光染料700、信号放大反应液、鼠兔通用型HRP标记二抗、抗荧光淬灭封片剂、DAPI.
    应用
    主要用于人源或小鼠组织、石蜡切片、TMA芯片的免疫组化染色。
    使用方法
    1.荧光染料的稀释:若染料为干粉,使用100ulDMSO溶解,制成100X染料母液;若染料为液态表示出厂即为DMSO溶解的100X母液;使用信号放大反应液按1:100稀释制备染料工作液(现用现配);DAPI使用无菌水按1:100稀释制备工作液。 2.二抗的使用:试剂盒标配为鼠兔通用型二抗,适用人源样本,不适用小鼠组织,实验前请核实一抗种属是否匹配。小鼠组织样本请参考(#abs50030)。
    性能
    储存/保存方法
    荧光染料需避光保存,2~8℃储存,收到货起有效期为12个月。
    注意事项
    1. 本试剂盒只用于免疫组化,不做其他用途。
    2. 本试剂盒仅限于专业人员使用。
    3. 应采用适当的防护措施,以避免试剂同皮肤和眼睛接触。
    4. 超过有效期的试剂活性可能降低,因此不得使用超过有效期的试剂。
    5. 若将本试剂盒的染色组分与其他公司的产品混合使用,在染色过程中可能出现异常情况。
    6. 脱蜡不彻底,容易影响染色效果。
    7. 为了防止可能出现的假阴性、假阳性结果,实验过程中需有阳性对照及阴性对照同时进行。
    8. 使用本试剂盒中所产生的各种废弃物都应按照《医疗废物管理条例》进行处理。
    参考文献
    参考文献
    1.Dabbs David J. 诊断免疫组织化学(M). 北京:北京大学医学出版社,2008.9.
    2.【美】Ed Harlow, David Lane. 抗体技术指南(M). 北京:科学出版社,2002:79-80,105.
    3.Stack, E. C., et al., Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods, 2014 70 (1): 46-58.
    4.钱帮国. 焦磊. 多标记免疫荧光染色及多普成像技术在组织学研究中的应用. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2017 (4): 373-382.
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
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    • 样本可以做成冰冻切片吗?
    • 可以的。抗原修复步骤不推荐用加热的方法,推荐用抗体洗脱液(abs994)
    • 所有操作要避光吗?
    • 不需要,在常规环境下操作就可以,染料的荧光强度很高。
    • 抗体修复液每一轮修复都要更换吗?
    • 是的,每一轮都要根据抗体选择相应的修复液。
    • 染料的选择会影响后染色吗,有共定位的话怎么办?
    • 共定位的情况,我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况,染料不会对染色有影响,串色的情况需要预实验做充足,包括抗体稀释比例,染料与放大液比例,修复条件的确定。
    • 多色用的一二抗各是什么种属?
    • 多色的优势在于一二抗种属无需特别要求,一抗根据样本种属选择既可,二抗根据一抗选择即可,多个抗体组合,种属不会有影响。
    • 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好?
    • 微波修复洗脱更稳定,抗体洗脱液对大多数抗体都管用,难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦!
    • 实验用时真的一天能做完吗?
    • 相比普通的组织荧光实验,我们一抗的孵育时间只需室温30min,二抗和信号放大步骤只需孵育10min,能大大节约时间,五色左右可在一天内做完。
    • 多色样本的寄送有条件限制吗?
    • 正常的石蜡切片和组织芯片很稳定,只要防震盒常温运输即可,冰冻切片的话,需要干冰低温运输。
    • 我的组织还有GFP蛋白,给结果的时候能排除干扰吗?
    • 可以的,结果分析的时候可以避免绿色通道,分析软件赋予的颜色是伪彩色,可以更换其他颜色。

    • 我这边提供抗体的话,抗体需要满足什么条件吗?
    • 抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用,各品牌供应商都会提供相应的实验验证的,爱必信组化抗体经过严格实验验证,是不错的选择。

    • 如果我能提供抗体给你们做服务的话,需要的抗体量是多少?
    • 需要的抗体量要根据样本数来,但一般来讲,50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。

    • 在指标与染料的搭配以及染色顺序上,有什么规律吗?
    • 并没有一个特别的线性关系,和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系,所以会多因素考虑,多尝试,预实验很重要。

    • TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤,但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有?
    • 试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。

    • B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗?
    • T细胞:CD3、CD4、CD8、FoxP3(再细化还有:GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45)
      B细胞:CD19 ;
      DC细胞:CD8α、CD11b

    • 荧光染料激发光和发射光波长分别是多少?
    • 荧光染料名 波长
      激发 Excitation 发射 Emission
      DAPI 360 461
      TSA单色荧光染料 520 490 520
      TSA单色荧光染料 540 520 540
      TSA单色荧光染料 570 550 570
      TSA单色荧光染料 620 590 620
      TSA单色荧光染料 650 640 660
      TSA单色荧光染料 670 650 670
      TSA单色荧光染料 690 660 690
      TSA单色荧光染料 700 682 702

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