七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(抗兔二抗)

- 多色试剂盒
货号-规格 | 货期 | 价格 | 数量 |
abs50031-20T | 现货 | ¥7096.00 | - + |
abs50031-100T | 1-2周 | ¥25920.00 | - + |

概述 | |
别名 | 多色试剂盒 |
描述 | 组织微环境中有复杂的细胞组成,这些细胞的表型、状态、丰度、分布都有着重要的生物学意义和临床价值。借助抗体染色可以将其在组织原位上呈现出来。免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术,常规IHC检测只能展示单一指标,难以呈现复杂的组织微环境中的细胞组成、状态和关系,而这些信息对疾病的诊断和治疗至关重要! 酪氨信号放大技术原理:类似常规免疫组化的DAB显色方法,TSA技术同样采用HRP标记的二抗,HRP催化加入体系的荧光素底物,生产活化荧光底物,活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合,使样品上稳定的共价结合荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的抗体,在换下一种一抗来第二轮孵育,换另一种荧光素底物,如此往复就可实现多重标记。 |
检验原理 | 多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理,选用辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗抗体,对试剂盒中的荧光染料进行活化,将信号共价结合到抗原上。借助于不同的荧光染料标记,通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。 |
产品组成 | TSA单色荧光染料520、TSA单色荧光染料540、TSA单色荧光染料570、TSA单色荧光染料620、TSA单色荧光染料650、TSA单色荧光染料700、信号放大反应液、抗兔HRP标记二抗、抗荧光淬灭封片剂、DAPI. |
应用 | 主要用于组织、石蜡切片、TMA芯片的免疫组化染色。 |
使用方法 | 1. 荧光染料的稀释:若染料为干粉,使用100ulDMSO溶解,制成100X染料母液;若染料为液态表示出厂即为DMSO溶解的100X母液;使用信号放大反应液按1:100稀释制备染料工作液(现用现配);DAPI使用无菌水按1:100稀释制备工作液。 2. 二抗的使用:试剂盒为抗兔二抗,实验前请核实一抗种属是否匹配。鼠兔通用二抗请参考(#abs50015)。 |
性能 | |
储存/保存方法 | 荧光染料需避光保存,2~8℃储存,收到货起有效期为12个月。 |
注意事项 | 1. 本试剂盒只用于免疫组化,不做其他用途。
2. 本试剂盒仅限于专业人员使用。
3. 应采用适当的防护措施,以避免试剂同皮肤和眼睛接触。
4. 超过有效期的试剂活性可能降低,因此不得使用超过有效期的试剂。
5. 若将本试剂盒的染色组分与其他公司的产品混合使用,在染色过程中可能出现异常情况。
6. 脱蜡不彻底,容易影响染色效果。
7. 为了防止可能出现的假阴性、假阳性结果,实验过程中需有阳性对照及阴性对照同时进行。
8. 使用本试剂盒中所产生的各种废弃物都应按照《医疗废物管理条例》进行处理。 |
参考文献 | |
参考文献 | 1. Mingzhu Yang, et al., Chemical-induced chromatin remodeling reprograms mouse ESCs to totipotent-like stem cells. Cell Stem Cell. 2022 Mar 3 2. Xin Guan, et al., Nanoparticle-enhanced radiotherapy synergizes with PD-L1 blockade to limit post-surgical cancer recurrence and metastasis. Nature Communication. 2022 May 20 3. Qian-Yue Zhang, et al., Lymphocyte infiltration and thyrocyte destruction are driven by stromal and immune cell components in Hashimoto’s thyroiditis. Nature Communications. 2022 Feb 9 4. Dabbs David J. 诊断免疫组织化学(M). 北京:北京大学医学出版社,2008.9. 5. 美】Ed Harlow, David Lane. 抗体技术指南(M). 北京:科学出版社,2002:79-80,105. 6. Stack, E. C., et al., Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods, 2014 70 (1): 46-58. 7. 钱帮国. 焦磊. 多标记免疫荧光染色及多普成像技术在组织学研究中的应用. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2017 (4): 373-382. |
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究 |
- 实验方法 实验条件
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- 做好的多色片子,无法进行及时扫描,该如何保存?
- 需要避光防震,在4℃条件下保存
- 有详细的实验操作流程吗?
- 有的,我们有完整的操作视频,您可以点击链接观看完整视频。
- 样本可以做成冰冻切片吗?
- 可以的。抗原修复步骤不推荐用加热的方法,推荐用抗体洗脱液(abs994)
- 所有操作要避光吗?
- 不需要,在常规环境下操作就可以,染料的荧光强度很高。
- 抗体修复液每一轮修复都要更换吗?
- 是的,每一轮都要根据抗体选择相应的修复液。
- 染料的选择会影响后染色吗,有共定位的话怎么办?
- 共定位的情况,我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况,染料不会对染色有影响,串色的情况需要预实验做充足,包括抗体稀释比例,染料与放大液比例,修复条件的确定。
- 多色用的一二抗各是什么种属?
- 多色的优势在于一二抗种属无需特别要求,一抗根据样本种属选择既可,二抗根据一抗选择即可,多个抗体组合,种属不会有影响。
- 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好?
- 微波修复洗脱更稳定,抗体洗脱液对大多数抗体都管用,难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦!
- 实验用时真的一天能做完吗?
- 相比普通的组织荧光实验,我们一抗的孵育时间只需室温30min,二抗和信号放大步骤只需孵育10min,能大大节约时间,五色左右可在一天内做完。
- 多色样本的寄送有条件限制吗?
- 正常的石蜡切片和组织芯片很稳定,只要防震盒常温运输即可,冰冻切片的话,需要干冰低温运输。
- 我的组织还有GFP蛋白,给结果的时候能排除干扰吗?
可以的,结果分析的时候可以避免绿色通道,分析软件赋予的颜色是伪彩色,可以更换其他颜色。
- 我这边提供抗体的话,抗体需要满足什么条件吗?
抗体最起码要满足IHC/IF的实验应用,各品牌供应商都会提供相应的实验验证的,爱必信组化抗体经过严格实验验证,是不错的选择。
- 如果我能提供抗体给你们做服务的话,需要的抗体量是多少?
需要的抗体量要根据样本数来,但一般来讲,50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。
- 在指标与染料的搭配以及染色顺序上,有什么规律吗?
- 并没有一个特别的线性关系,和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系,所以会多因素考虑,多尝试,预实验很重要。
- TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤,但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有?
试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。
- B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗?
T细胞:CD3、CD4、CD8、FoxP3(再细化还有:GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45)
B细胞:CD19 ;
DC细胞:CD8α、CD11b
- 荧光染料激发光和发射光波长分别是多少?
染料名称
保存温度
波长
相似荧光染料
激发波长
发射波长
DAPI
-20℃
360
461
DAPI
TSA单色荧光染料480
430
480
Opal480
TSA单色荧光染料520
490
520
FITC/AF488/Opal520
TSA单色荧光染料540
520
540
AF514/Opal540
TSA单色荧光染料570
550
570
CY3/AF555/Opal570
TSA单色荧光染料620
590
620
AF594/Opal620
TSA单色荧光染料650
640
660
AF610/Opal650
TSA单色荧光染料670
650
670
APC/CY5/AF647/Opal670
TSA单色荧光染料700
682
702
AF680/CY5.5/Opal690
TSA单色荧光染料770
740
780
Opal780
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