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  • 胶原酶 III型

    • Collagenase
    货号: abs47048002
    CAS号: 9001-12-1
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs47048002-100mg 1-2周 ¥672.00
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    abs47048002-1g 现货 ¥5040.00
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    产品描述
    描述

            胶原酶(Collagenase)是一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。
            胶原酶来源于溶组织梭菌(Clostridiumhistolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能够降解天然胶原和网状纤维;还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类,其在应用上具有一定区分。
            本品是III型胶原酶,活性≥125units/mg冻干物,含较低的次级蛋白酶污染物水解活性,但具典型的胶原酶活性。常用于乳腺组织的原代细胞制备。

    来源
    溶组织梭菌
    纯度
    活性>125CDU/mg
    使用方法
    使用方法:
    一、储存液制备:
    1、直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液,轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。
    2、根据具体批次的酶活力,用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl(1000×储存液),之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。
    3、立即使用或将储存液根据单次用量分装,置于-20℃避光保存。
    4、使用前置于冰上融化,避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml(或0.5-2.5mg/ml),具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。
    二、组织分离:
    1、用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片,之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次;
    2、加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片,之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶;
    3、37℃孵育4-18h,置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
    4、将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
    5、将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
    6、低速离心,吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞,使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
    三、器官灌注:
    1、将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液,使其浓度为50-200U/ml,或根据具体实验体系调整;另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
    2、按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注;
    3、将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。
    4、将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。
    5、低速离心,吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞,使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。
    储存/保存方法
    2-8℃干燥保存,可置于-20℃长期保存,有效期2年。
    注意事项
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    基本信息
    外观
    棕褐色或淡褐色粉末
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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