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【小爱科普】抗体相关问题FAQ

时间：2019-08-30 点击次数：1147

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 1.如何保存和分装抗体？
  • 对于许多抗体而言，分装为小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的保存条件。
  • 抗体保存应避免反复冻融，分装可以最大限度减少冻融对抗体造成的损坏，还可避免多次从同一管中移取抗体而引入污染。
  • 但是每份不应该少于10 uL。分装的体积越小，抗体的浓度受蒸发和管壁吸附的影响就会越大。
  • 大部分情况下，抗体在 4 ℃条件下能够保存1-2周。但有部分特例。
  • 为了防止微生物污染，可在抗体中加入适当浓度的叠氮化钠。如果要用抗体对活细胞进行染色或处理，或者要用抗体进行体内研究，则不能使用含叠氮化钠的抗体制备物；这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用。
  • 部分加甘油的抗体，直接储存在-20℃即可。
 
2.如何正确选择一抗？
根据检测的种属和实验方法寻找相关一抗产品，样品的性质决定哪个抗体最合适。需考虑以下方面：
  • 检测的蛋白质区域。有些抗体仅能识别已还原和变性的蛋白质，因为这样露出了蛋白质折叠形成的二级和三级结构中隐藏起来的表位。而有些抗体仅能识别天然、折叠状态的蛋白质上的表位。免疫组化中，有些抗体仅适用于未固定的冷冻组织，如果没有抗原修复步骤逆转福尔马林固定所引起的交联，那么其它抗体不能与福尔马林固定、石蜡包埋的组织中的靶标结合。
  • 样品处理方式；有些抗体要求样品用特定方式处理。
  • 产生一抗的生物体应与样品生物体不同；这是为了避免抗免疫球蛋白的二抗与样品中的内源性免疫球蛋白间发生交叉反应。
 
3.如何正确选择二抗？
二抗是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗。考虑以下方面：
  • 针对一抗来源的二抗；比如一抗是小鼠来源的，二抗就要是抗小鼠的。
  • 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配；比如一抗是IgM，二抗就要是抗IgM的抗体。
  • 为了增加特异性、降低背景：可以选择Fab段的抗体（去除Fc段的）、经过标本来源种属血清吸附的的二抗。
  • 查看二抗的说明书，选择经过验证可以用于相应实验方法的二抗。
  • 可以通过一抗说明书页面的“Related Products”来选择合适的二抗。
  
4.二抗耦联标记
标记物与抗体偶联，以显示目标蛋白的存在。标记物的选择取决于实验应用。主要有：
  • 荧光标记；荧光标记物在特定波长的光激发下发出可见范围内的光。有多种荧光标记物可供选择，它们具有特有的激发和发射特性。
  • 酶标记；酶标记物如辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (AP) 在与适当的底物混合时形成有色沉淀。
  • 生物素标记；生物素化的抗体可用于放大信号，具体通过亲和素-生物素-酶或荧光染料复合物或者亲和素或链霉亲和素偶联到酶或荧光染料实现。
 
5. 如何确定抗体的稀释比例?
如果说明书中有推荐的稀释比例，请按照该稀释比例进行实验。但是由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响，推荐浓度仅作为参考。
实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验，从中发现最佳的稀释比例。如果说明书没有推荐稀释比例，仅注明“Use at an assay dependent dilution”，就需要做大量的预实验来摸索最佳的稀释比例。
 
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