质粒DNA转染试剂盒（贴壁细胞）

方法步骤（以24孔板转染为例）:

A、细胞接种:

1、转染前24小时左右对细胞进行转接，培养过夜；

2、确保转染时细胞密度为90%左右；

3、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

B、R /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):

1、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，再加入适量的转染

试剂，见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

2、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基，加入适量的溶液A，轻轻混匀，再加入适量的DNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。

3、将DNA-培养基混合物滴加至R-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： R-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合顺序非常重要，切勿颠倒。

注意：离心管最好使用聚丙烯离心管。

C.转染:

1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。

2、培养12小时后即可观察，最佳观察或收获时间为24~48小时。

3、R在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入R/DNA复合物12~24小时后进行

附表：不同培养体系推荐初始转染条件

注意事项：

• 转染前的细胞汇合度以90%左右为宜，转染时细胞生长状态应保持良好，不要有支原体污染。
• 首次转染，建议进行优化实验，如24孔培养板，每孔质粒用量 0.8ug，转染试剂用量可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。
• 应避免转染复合物制备体系中存在血清，因血清会干扰R与 DNA形成复合物，培养基中尽量不要使用抗生素。
• 如果需要稳转，请在转染24-48h后加入筛选培养基。
• 本试剂主要用于质粒DNA转染，如需质粒DNA、RNA、siRNA均 可转染的试剂，请选择Prime核酸转染试剂。

注意： 本产品仅用于科研实验