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  • T4 DNA Ligase

    货号: abs60084
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60084-500U 1-2周 ¥336.00
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    abs60084-500U×10 1-2周 ¥3150.00
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    产品描述
    描述
    在有Mg2+和ATP存在的条件下,T4 DNA Ligase能催化双链 DNA或RNA上相邻的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻,但不能催化单链 DNA 之间的连接。
    酶储存缓冲液:
    10 mM Tris-HCl (pH 7.5) ,50mM KCl,1mM DTT, 0.1mM EDTA,50% (v/v) glycerol。
    5 × T4 DNA Ligase Buffer
    250 mMTris-HCl (pH 7.5), 50mM MgCl2,50mM DTT, 5mM ATP,连接促进剂。
    来源
    纯化于携带T4 DNA ligase 基因 的E. coli 菌株。
    浓度
    5U/μl
    储存/保存方法
    -20℃保存,有效期12个月。
    技术指标

    抑制剂和热失活:
    大于200mM的NaCl或KCl可以强烈抑制连接酶活性。65℃加热 10分钟或70℃加热5分钟即可失活。
    单位定义:
    在37℃,20分钟内交换1 nmole 的32PPi所需要的酶量定义为一个Weiss单位。本产品酶1U(Weiss Unit)相当于200个粘性末端单位。在T4 DNA 连接酶反应缓冲液中,16℃条件下,30分钟能够使50%的经Hind III消化的λDNA 片段连接所需要的酶量为一个粘性末端单位。

    质量控制:
    蓝白斑分析实验表明白斑数小于2%;过量T4 DNA Ligase 混合超螺旋质粒检测实验表明无核酸酶检出;SDS-PAGE检测重组蛋白纯度大于99%。

    注意事项
    1、化冻 5×T4 DNA Ligase Buffer 后,需要混匀后再使用。
    2、T4 DNA Ligase 最适活性温度为 37℃,但是高温连接形成的连接产物的转化效率会大大降低,所以选用 25℃或 16℃等稍低的连 接温度。如果连接产物不用转化且需要高的连接效果,可以在 37℃条件下进行。
    3、该酶需要 Mg 2+为激活剂,因此螯合 Mg 2+的 EDTA 的存在会阻碍连接反应。溶解于高浓度 EDTA 缓冲液的 DNA 需要用灭菌水或 TE 缓冲液进行置换。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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