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  • 快速内切酶ScaI

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      • 酶切后的DNA片段连接效率低

      • 1)含磷酸盐的浓度高:透析,乙醇沉淀去除磷酸盐;

        2)内切酶失活或含有ATP酶:更换内切酶;

        3)平末端连接:加大T4 DNA Ligase用量;

        4)连接缓冲液不合适:重新配制连接缓冲液。

      • 限制性内切酶无法切割DNA有哪些原因?
      • 1)内切酶失活:用标准底物检测酶活性;
        2)DNA不纯,含有SDS、酚、EDTA等内切酶抑制因子:将DNA过柱纯化,乙醇沉淀DNA。
        3)条件不适(试剂、温度):检查反应系统是否最佳。
        4)DNA不存在该酶识别序列:换用其它的酶切割DNA或过量酶消化验证。
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