Reverse Transcriptase II
货号-规格 | 货期 | 价格 | 数量 |
abs60072-10000U | 1-2周 | ¥1155.00 | - + |
abs60072-10000U×5 | 1-2周 | ¥5145.00 | - + |

产品描述 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
描述 | Reverse Transcriptase II 是对M-MuLV(RNase H-)进行基因工程改造,表达并纯化的高温逆转录酶,比M-MuLV(RNase H-)提高了热稳定性。该酶可以在高温条件下(50~60℃)进行cDNA第一链的合成,高温条件下有利于打开复杂RNA模板链。该酶最佳反应温度为50℃,具有热稳定相强,灵敏度高,特异性高,聚合能力强等优点。 产品组分:
实验方法: cDNA 第一链合成反应体系: 试剂融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。 (1) 按顺序加入以下反应物
(2)可选优化步骤:如果RNA模板GC含量高或含有二级结构,可先将模板与引物的混合液轻轻混匀,短暂离心,65°C 孵育5min,冰上冷却。 (3)轻轻混匀,离心。 (4)如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物,50°C 孵育15-30min。 使用随机六聚体引物时,25°C,先孵育5min,随后50 °C 孵育15-30min。对于高GC含量或者具有复杂二级结构的RNA模板,使用60℃孵育 15-30min。 (5)70°C 加热5min终止反应。反应产物可直接用于 PCR 反应,如果不立即使用,-20°C 保存少于一周的时间。长时间保存建议-70°C 放置。 第一链 cDNA 的 PCR 扩增: 合成的第一链cDNA可直接用于PCR。 常用反应体系(50μl)
*Mg2+终浓度为 2mM 常用 PCR 循环
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使用方法 | 使用建议:1、用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。2、确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。3、试剂盒要严格密封保存。在反转录过程中,所有管子确保扣严。4、纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。5、可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。6、为保证反转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。7、最快可达2kb/min,需要提高反转录效率或模板含量较低时可以适当延长反转录时间。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
储存/保存方法 | -20℃ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
技术指标 | 质量保证: 经多次柱纯化,SDS-PAGE 胶检测仅可见清晰单一目的条带。PCR 方法检测无大肠杆菌 DNA 残留,无核酸内、外切酶污染,无 RNA 酶污染。 活性定义: 以 Poly(rA)•Oligo(dT)为模板/引物,在 50℃、10 分钟条件下,掺入 1 nmol 的[3H] dTTP 所需要的酶量定义为 1 个活性单位。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
产品用途 | 1、1st Strand cDNA的合成; 2、cDNA Probe的制备;3、RT-PCR反应以及Real Time RT-PCR反应。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究 |
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- 酶没有RNaseH活性。
- 这个产品是否含有甘油?可以做冻干处理嚒?
- 含有甘油,无法进行冻干。
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