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  • 2×Pfu Master Mix

    货号: abs60056
    产品说明书
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    abs60056-1ml 现货 ¥137.00
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    abs60056-1ml×5 1-2周 ¥588.00
    - +
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    产品描述
    描述

    本制品是将PCR反应所需的Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂和稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3×10-6。使用时只需要加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。

    产品特点:

    高保真:Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。

    灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。

    快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。

    实验方法:

    常用反应体系(50μl):

    2×Pfu Master Mix*

    25ul

    上游引物

    0.2-1.0uM(终浓度)

    下游引物

    0.2-1.0uM(终浓度)

    模板

    1-50ng(质粒)

    10ng-1ug(基因组)

    ddH2O

    至50ul

    *Mg 2+终浓度为2mM

    常用PCR循环:

    当扩增片段<3K;

    94℃

    1 分钟 30 秒

    30 次循环

    94℃,20 秒

    50~60℃,20 秒

    72℃,1kb/30 秒

    72℃

    5 分钟

    4℃

    保温

    当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp);

    94℃

    5 分钟

    30 次循环

    94℃,5 秒

    68℃,1kb/30 秒

    72℃

    5 分钟

    4℃

    保温

    使用建议:

    Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3´端"A"突出,除使用PCR一步定向克隆试剂盒外,其它PCR产物的克隆方案有:

    (1)PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

    (2)将产物3´末端加A后再与T载体连接。

    (3)由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3’→5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。

    储存/保存方法
    -20℃
    技术指标

    经检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

    产品用途
    用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
    注意事项
    1、需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
    2、应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足。循环数过多,扩增量增加,但突变率会增加,并造成非特异性扩增。
    3、根据引物Tm值设置合适的退火温度,退火温度过低,会造成非特性扩增。退火温度过高,可能扩增不到目的条带。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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