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  • One-Step RT-PCR Kit

    货号: abs60074
    产品说明书
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    abs60074-200次 1-2周 ¥1680.00
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    产品描述
    描述

    One-Step RT-PCR Kit一步法RT-PCR试剂盒具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等特点。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板,cDNA合成和PCR反应在一个管中进行,反转录结束后可直接进行PCR循环而不用增加额外的步骤;同时可对低至1fg的总RNA进行扩增,有助于大量样品的处理并减少污染机会。
    产品组分:

    组分体积
    RT Enzyme Mix200ul
    2× One-Step RT-PCR SuperMix1ml×2 
    RNase Free Water 1ml×2 

    产品特点:

    效率高,可反转录GC含量高,二级结构复杂的RNA模板。

    独特的缓冲体系使反转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。

    操作简单,可最大限度的避免污染。

    实验方法:

    1、将 RNA 模板、引物、2×One-Step RT-PCR SuperMix,RT Enzyme Mix 和RNase Free Water 溶解并置于冰上备用。
    2、配置以下反应体系:

    模板RNA

    0.1ng-5ug

    RT Enzyme Mix

    1ul

    2×One-Step RT-PCR SuperMix

    10ul

    上游引物(10μM)

    0.5-1ul

    下游引物(10μM)

    0.5-1ul

    RNase Free Water

    至 20ul

    3、轻轻混匀后短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
    4、常用反应程序:

    42℃

    5min/5000bp

    95℃

    5 分钟

    25-30 次循环:

    94℃,20 秒

    50-60℃,20 秒

    72℃,1kb/60 秒

    72℃

    5 分钟

    4℃

    保温
    储存/保存方法
    -20℃
    注意事项
    1、本试剂盒PCR扩增延伸时间为1kb/min,客户可根据具体片段长度进行延伸时间的调整。
    2、通常情况,28~30个循环可达到最佳扩增,对于低拷贝目的基因的检测,可将循环数增加到40个。
    3、如果同时操作多个样品,建议先在冰上先配制预混液,然后再分装到各个反应管中,加入模板启动反应。
    4、反应出现目标条带拖带,系模板浓度过高或特异引物浓度不适等原因所致,可对模板及引物浓度等进行调整;反应出现杂带,可对退火温度进行调整,或重新设计特异性高的引物。
    5、本试剂盒只需使用特异性反转录引物,无需使用Random Primer和OligodT Primer等进行反转录反应。
    6、为了保证反应的正常进行,需使用高质量的RNA模板。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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