快速内切酶MspI
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酶切后的DNA片段连接效率低
1)含磷酸盐的浓度高:透析,乙醇沉淀去除磷酸盐;
2)内切酶失活或含有ATP酶:更换内切酶;
3)平末端连接:加大T4 DNA Ligase用量;
4)连接缓冲液不合适:重新配制连接缓冲液。
- 限制性内切酶无法切割DNA有哪些原因?
- 1)内切酶失活:用标准底物检测酶活性;
2)DNA不纯,含有SDS、酚、EDTA等内切酶抑制因子:将DNA过柱纯化,乙醇沉淀DNA。
3)条件不适(试剂、温度):检查反应系统是否最佳。
4)DNA不存在该酶识别序列:换用其它的酶切割DNA或过量酶消化验证。