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  • 超纯土壤基因组DNA快速提取试剂盒

    货号: abs60020
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    abs60020-50T 1-2周 ¥1575.00
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    产品描述
    描述
    普通的手提或者试剂盒提取的土壤基因组DNA由于常常残留有PCR的强烈抑制物如腐殖酸、棕黄酸等杂质造成实验失败;另外,由于采用了剧烈的玻璃珠击打来破裂菌体,常常造成DNA剪切和降解。本公司的土壤基因组DNA,通过腐殖酸和棕黄酸去除试剂配合特殊处理的纯化柱,可以最大程度的去除这些杂质,同时加上多次柱漂洗,确保得到的DNA具有极高纯度,此外独特的抽提和裂解体系可以迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性。
    产品特点:
    1、本公司的配方和纯化柱能有效去除腐殖酸等杂质。
    2、不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性,长度可达30kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
    3、兼容性强,适用于各种不同的土壤包括淤泥等提取困难的土壤。
    4、提取纯度高,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。
    自备试剂:无水乙醇。
    产品信息:
    组分保存50次
    溶液 SUS室温25ml
    溶液 LYS室温6ml
    溶液 S1室温15ml
    溶液 S2室温15ml
    溶液 S3室温30ml(第一次使用前,请加 60ml 无水乙醇)
    抑制物去除液 IR室温25ml
    漂洗液 WB室温15ml(第一次使用前加入 60ml 无水乙醇)
    洗脱缓冲液 EB室温10ml
    蛋白酶 K(20mg/ml)室温1ml
    吸附柱 AC室温50个
    收集管室温50个
    使用方法
    提示:第一次使用前请先在漂洗液 WB 和溶液 S3 中加入指定量无水乙醇,充分 混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 1、取 0.2g 土壤放入离心管,用牙签或者枪头捣碎后加入 0.5ml 溶液 SUS,用枪头搅拌 后短暂涡旋帮助重悬。 如果预计土壤里面含有较多难裂解的菌类如革兰氏阳性菌,可先在 0.5ml 溶液 SUS 里面加入溶菌酶,吹打混匀后再加入,并加做步骤 2。 2、(可选步骤):37℃温育 30 min,每 10 min 颠倒混匀几次。对于难裂解的菌类如革兰氏阳性菌含量丰富的土壤,并在上一步骤加入了溶菌酶的 样品,需要加做此步骤来帮助裂解。3、加入 20μl 蛋白酶 K(20mg/ml)溶液,短暂涡旋帮助混匀。可选做步骤: 为提高产量,可以在 37℃振荡 10min 或者涡旋振荡 2 min。(注意涡旋振 荡可能剪切 DNA)4、加入 120μl 溶液 LYS,短暂涡旋混匀,65℃温育 30 min,期间颠倒混匀几次。 65℃温育时间可以根据具体样品种类和产量进行延长或者缩短以取得最佳产量和纯 度,可在 10 min-2 小时范围内调整。5、(可选步骤):于-70℃冷冻,65℃融化,反复 3 次。对于难裂解的菌类如革兰氏阳性菌含量丰富的土壤,可加做此步骤来帮助裂解。6、颠倒混匀后,12,000rpm 离心 2 min,小心转移上清至新的离心管(记录上清体积)。7、加入 1/3 体积的溶液 S1,颠倒几次,涡旋 5 sec 混匀后,冰上放置 5 min。 8、12,000rpm 离心 5 min,小心转移上清至新的离心管(记录上清体积)。9、加入 1/3 体积的溶液 S2,颠倒几次,短暂涡旋混匀后,冰上放置 5 min。该步骤主要是进一步去除 humic substance 等 PCR 抑制物质以提高纯度,但是会降 低一些产量,如果对产量要求高或者提取的 DNA 不用于 PCR,可以尝试略去此步骤 以提高产量。如果预计土壤成份复杂 PCR 抑制物质多,可以适当提高 S2 加入量(如加 入等体积的 S2),可以提高纯度,但是注意也会显著降低产量。10、12,000rpm 离心 5 min,小心转移上清至新的离心管(记录上清体积)。11、加入 1.5 倍体积的溶液 S3(请先检查是否已加入无水乙醇!),颠倒几次,短暂涡旋混 匀。12、将上一步混合物 700μl(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入 收集管中),12,000rpm 离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液。重复直到所有的混合 物都加完。13、加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30 sec,弃废液。14、加入 500μl 漂洗液 WB(加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 sec,弃掉废液。15、重复操作步骤 14。16、将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。17、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 50-100μl 洗脱 缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置 3-5 min, 12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置 2 min,12,000rpm 离心 1 min。
    储存/保存方法
    室温保存,有效期12个月。
    注意事项
    1、溶液 LYS 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用,注意不要剧烈摇晃,以免 产生大量气泡。
    2、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖 紧盖子。
    3、溶液 S3 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染 皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
    4、洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保批pH大于7.5,pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。 DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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