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  • 核酸转染试剂盒

    促销商品
    货号: abs60259
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60259-0.5ml 1-2周 ¥1856.00 ¥1114.00
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    abs60259-1.0ml 1-2周 ¥3488.00 ¥2093.00
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    abs60259-1.5ml 1-2周 ¥5056.00 ¥3034.00
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    产品描述
    描述
    产品介绍
    该产品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基础上进一步研发成功的专门用于核酸高效转染的试剂盒。它具有非常卓越的转染性能,可高效转染绝大多数贴壁细胞,转染效率可高达90%以上(Hela细胞,EGFP质粒)。其功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同,该试剂盒采用生物可降解材料配制,对细胞的毒性很低,转染后24小时细胞几乎无明显死亡。它使用也非常方便,先将转染试剂与质粒DNA混合,再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中,血清不影响其转染效果,不必刻意添加或更换培养液,操作十分简便。它适合于贴壁细胞的核酸转染,如需转染原代细胞,请选择原代细胞核酸转染试剂盒(abs60324)。如需转染悬浮细胞,请选择悬浮细胞核酸转染试剂盒(abs60325)。

    产品特点:
    1、卓越的细胞转染性能:可高效转染多种贴壁细胞,转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上;
    2、转染功能强大,不仅可高效转染大分子质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA;
    3、极低的细胞毒性:使用可降解生物材料,细胞毒性低,转染细胞死亡率不到10%,大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响;
    4、操作简便,可用于含血清培养基培养细胞的转染,转染前后不需要更换培养液。
    使用方法

    操作步骤:

    一、质粒DNA转染(以24孔板转染为例):

    A、细胞接种:

    1、转染前一天对细胞进行转接,每孔接种1.5-2.0×105个细胞,使转染时细胞密度为90%左右,且生长良好(非常重要);

    2、最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基,以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

    B、试剂A /DNA转染复合物制备(该步完成后应立即进行转染):

    1、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,再加入适量的转染试剂,见附表。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

    2、在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并加入适量的试剂B,轻轻混匀,再加入适量的DNA,见附表。用移液器再次轻轻混匀后在室温静置5分钟。

    3、 将DNA-培养基混合物滴加至试剂A-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。

    注意: 试剂A-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。

    注意:离心管最好使用聚丙烯离心管。

    C、转染:

    1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。

    2、培养12小时后即可观察,最佳观察或收获时间为24~48小时。

    3、试剂A在完全培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

    二、siRNA转染(以24孔板转染为例):

    A、 细胞接种:

    1、转染前一天对细胞进行转接,使转染时细胞密度为30-50%左右,且生长良好、无支原体污染(非常重要);

    2、 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基,以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。

    B、试剂A /siRNA转染复合物制备 (该步完成后应立即转染):

    1、 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的转染试剂(见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

    2、 在1.5 ml无菌离心管中加入50µl无血清培养基,并添加适量的siRNA(见下表),用移液器轻轻混匀后在室温静置5分钟。

    3、将siRNA-培养基混合物滴加至试剂A-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后,立即转染。

    C、转染:

    1、将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中,边加边轻轻晃动培养板。加完后,立即将培养板转入培养箱继续培养。

    2、37°C培养24-72h,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养4-6h时可以更换培养基,但不是必须。

    3、 试剂A在完全培养基中仍有较高的转染效率,因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。

    注意事项:

    1、首次转染,请务必进行优化实验,如24孔板质粒转染,每孔质粒用量0.8ug, 试剂A可选择2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul进行优化。24孔板siRNA转染,试剂A用量2ul,siRNA用量可选10pmol、20pmol、30pmol、40pmol进行优化。

    2、 在制备DNA或siRNA转染复合物时,应避免体系中存在血清,因血清会干扰试剂A与DNA或siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素,抗生素会导致培养细胞死亡。

    3、试剂B仅用于质粒转染,RNA或siRNA转染不需加入试剂B。

    4、 请注意质粒转染和siRNA转染时对细胞密度和转染试剂用量等条件的差异,不要混用同一条件。

    5、如果需要质粒稳转,请在转染24-48h后加入筛选培养基。

    6、 本产品适合于质粒DNA、siRNA分别独立转染,如需质粒DNA、siRNA共转,请选用核酸共转染试剂盒。

    附表 1:质粒转染不同培养体系推荐初始转染条件

    培养皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
    培养基、试剂、DNA量无血清培养基(μl)2x102x252x502x1002x2002x1000
    试剂A (μl)0.51.32.551050
    试剂B (μl)0.4124840
    1μg/μl plasmid (μl)0.160.40.81.63.216
    完全培养基(ml)0.10.250.51210


    附表 2:siRNA 转染不同培养体系推荐初始转染条件

    培养皿96 孔板48 孔板24 孔板12 孔板6 孔板10cm 皿
    培养基、试剂、DNA量无血清培养基(μl)2x102x252x502x1002x2002x1000
    试剂A (μl)0.4124840
    siRNA (pmol)410204080400
    完全培养基(ml)0.10.250.51210
    储存/保存方法
    -20°C 保存,使用前请轻轻混匀;有效期1年。
    技术指标

    试剂盒包装

    货 号试剂A试剂B
    abs60259-0.5ml0.5ml0.40ml
    abs60259-1.0ml1.0ml0.80ml
    abs60259-1.5ml1.5ml1.2ml


    转染效率:可高效转染多种贴壁细胞,转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上;
    细胞死亡率:死亡率不到10%
    产品用途
    可高效转染绝大多数贴壁细胞,转染效率可高达90%以上(Hela细胞,EGFP质粒)。试剂A功能强大,不仅可高效转染较大分子的质粒DNA,还可高效转染mRNA、siRNA、mimics和各种小分子DNA。
    注意事项
    本产品仅用于科学研究,不得用于医学临床用途。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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