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  • SP悬浮细胞小核酸转染试剂

    促销商品
    货号: abs60254
    产品说明书
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    abs60254-0.5ml 现货 ¥3024.00 ¥1814.00
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    abs60254-1.0ml 现货 ¥5408.00 ¥3245.00
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    abs60254-1.5ml 现货 ¥7712.00 ¥4627.00
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    产品描述
    描述
    产品介绍:
    这款产品是在PM原代细胞小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。它可用来转染siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor等200bp以内的小分子RNA,可转染绝大多数悬浮细胞。目前,无论国外还是国内,悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题,市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。这款产品能够高效转染绝大多数悬浮细胞,获得比较理想的基因敲除效果。对于大多数悬浮细胞,这款产品的细胞转染阳性率都在75%以上,而转染细胞死亡率不到10%。使用也极其简便,先将sRNA与这款试剂盒室温混合,再将它们的混合物直接加入含培养基的细胞,血清对转染效果没有影响,不必刻意添加或更换培养液。
    产品特点:
    1、卓越的悬浮细胞转染性能:细胞转染阳性率一般在75%以上,基因敲除效率在80%以上;
    2、极低的细胞毒性:转染细胞死亡率不到10%,大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响;
    3、转染细胞范围广,绝大多数悬浮细胞都能获得比较理想的转染结果。
    4、减轻操作繁琐程度:无需特意使用Opti-MEM Medium,无需4小时换液,无换液等待之苦,血清不影响转染结果
    使用方法

    操作步骤:

    本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验,其他规格的培养板的用量参照下面表格,表格给出的是每孔的用量与体积。

    A、细胞接种:转染前一天接种细胞,接种细胞量(2-3)x105,每孔 500 μl 培养基,转染前细胞生长状态保持良好,尽量不要使用抗生素。

    B、siRNA-SP混合物准备:

    1、30 pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。

    2、2μl SP用 50μl 无血清培养基稀释,轻轻混匀,室温孵育 5min。注意:确保在 25 min 内执行第三步操作,不要过于延迟。

    3、孵育 5min 后,将 siRNA 稀释液与SP稀释液混合(总体积 100μl)。轻轻混匀,室温孵育 20 min。

    C、将混合物加到培养的细胞内(完全培养基培养):

    1、将 100μl 混合物加入培养孔内,培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板 5min,混匀。

    2、37°C 培养 24-72h,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养 4-6h 时可以更换培养基,但不是必须。孵育时间的长短,取决于细胞类型、 所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

    注意事项:

    1、悬浮细胞转染难度较大,首次转染时,请务必对转染条件进行优化。例如:24 孔培养板,可进行如下交叉实验:

    SP转染试剂

    siRNA(pmol)

    2ul

    20、30、40、50

    3ul

    20、30、40、50

    4ul

    20、30、40、50

    2、转染时,细胞生长状态应保持良好,密度不能过大,培养液尽量不要使用抗生素,否则会导致细胞死亡增加。

    3、为了提高转染效率,转染后培养板可放于微型振荡器上培养或每隔 1 小时人工晃动 1 次。

    SP Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
    Culture vesselSurface area/well
    (cm2)
    Vol. of growth medium(μl)Vol. of dilution medium(μl)siRNA Amount
    (pmol)
    SP
    (μl)
    96-well0.31002 x 1060.6
    48-well0.82502 x 25151.5
    24-well25002 x 50303
    12-well410002 x 100606
    6-well1025002 x 25015015
    储存/保存方法
    短期4°C 保存,超一个月-20°C 储存,避免反复冻融,有效期 1年
    产品用途
    适用于K562(人慢性髓系白血病细胞),BHK-21(乳仓鼠肾细胞),CHO-S(仓鼠卵巢细胞),293F(人肾上皮细胞),人单核细胞THP-1细胞系(悬浮细胞),原代猪脾脏淋巴细胞(悬浮原代细胞),Jurkat ,NB4细胞(急性早幼粒细胞白血病细胞株),MEL(小鼠红白血病细胞),巨噬细胞等。
    注意事项
    本产品经严格的质量检验证明,无生物污染,注意: 本产品仅用于科研实验
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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