PM原代细胞小核酸转染试剂

产品介绍：
这款PM原代细胞小核酸转染试剂是专门用于原代细胞小核酸转染的试剂，它是在小核酸转染试剂基础上进行改良而成的。它可用来转染siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor等200bp以内的小分子RNA，可转染绝大多数原代细胞。目前，无论国外还是国内，原代细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。它能够高效转染绝大多数原代细胞，获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫，它也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞，这款产品的细胞转染阳性率都在80%以上，而转染细胞死亡率不到10%。这款产品使用非常便捷，先将sRNA与该试剂室温混合，再将它们的混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液

产品特点：
1、卓越的原代细胞转染性能：细胞转染阳性率一般在80%以上，基因敲除效果明显，肝细胞Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上；
2、极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
3、转染细胞范围广，绝大多数原代细胞都能获得比较理想的转染结果。
4、减轻操作繁琐程度：无需特意使用Opti-MEM Medium,无需4小时换液，无换液等待之苦，血清不影响转染结果

siRNA 转染;miRNA mimics 转染;200bp 内的小分子 RNA 转染

操作步骤：
本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基，使细胞在转染时密度在30-50%，尽量不要使用抗生素。
B. siRNA-PM混合物准备：
1、12pmol siRNA 用50μl无血清培养基稀释。
2、2μl PM用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。注意：确保在25 min内执行第三步操作，不要过于延迟。
3、孵育5min后，将siRNA 稀释液与PM稀释液混合（总体积100μl）。轻轻混匀，室温孵育20 min。
C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：
1、将100μl混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。
2、37°C培养18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

转染实验优化：
为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24孔培养板，siRNA用量在6、12、18、24、30 pmol (final concentration 10- 50 nM)之间调整，SP试剂用量在1.0 - 3.0μl之间调整。

转染实验要点：
1、转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；
2、首次实验siRNA的用量设置在终浓度10nM、20nM、30nM、40nM、50 nM进行摸索 ，后续实验根据实验结果修改。

短期4°C 保存，超一个月-20°C 储存，避免反复冻融，有效期 1年

适用于Clone 9（大鼠肝细胞），HUVEC（人脐静脉原代内皮细胞），原代血管平滑肌细胞，大鼠原代心肌细胞，Primary Human Fibroblasts（人原代成纤维细胞），大鼠骨髓间充质干细胞，MSC（间充质干细胞），BE(2)C（人神经母细胞瘤细胞），MRC-5（人胚胎成纤维细胞），NIH3T3（小鼠胚胎成纤维细胞），B16F10（小鼠黑色素瘤高转移细胞），BNL.CL2（小鼠胚胎肝细胞），C6（大鼠神经胶质瘤细胞），神经元细胞等。

本产品经严格的质量检验证明，无生物污染，注意： 本产品仅用于科研实验