组织冻存试剂盒

组织冻存流程： 
清洗、处理组织→玻璃化液 1、2、3→液氮玻璃化→储存 
必备材料： 
1、组织切片模具（abs9486）1 个及配套刀片（abs9487）3~5 片 
2、无菌纱布 1 片 
3、秒表或计时器 1 个 
4、液氮 250ml 及液氮杯 1 个 
5、直头镊小号（11 厘米左右）和中号（16 厘米左右）各 1 把 
6、2~8℃冰箱 
7、60mm 或 100mm 培养皿若干 
8、基础培养基 
可能需要的材料： 
1、眼科剪和眼科镊 
2、含双抗的生理盐水或 PBS 缓冲液
操作步骤： 
（1）检查组织，确定待处理和冻存的部位，清除坏死、多余组织及残余的血块、粘膜。如有血液，应用生理盐水或 PBS 冲洗净，如标本为结直肠癌或皮肤癌，应充分冲洗以避免可能的微生物污染。 
（2）使用 abs9486 和 abs9487 将组织切成 1mm 厚的组织片，若某些组织松散呈糜烂状切成 1mm 不容易保持形态完整，可切成 2mm 厚。 
（3）选取形态较完整的组织片浸入 V1 溶液中处理 8min，在 4min 时上下轻轻颠倒混匀 3~5 次。 
（4）将 V1 溶液倒入培养皿中，再将组织片轻柔移入 V2 溶液中处理 8min，在 4min 时上下轻轻颠倒混匀 3~5 次。 
（5）将 V2 溶液倒入培养皿中，再将组织片轻柔移入 V3 溶液中处理 10min，在 5min 时上下轻轻颠倒混匀 3~5 次。 
注意：V3 溶液处理结束后，组织片沉降于管底或半悬浮于 V3 溶液中。如果组织漂浮于 V3 液面上，说明组织片中非细胞成分较多，可在 V1、V2、V3 处理期间增加颠倒混匀的次数。 
（6）将 V3 溶液倒入培养皿中，将组织支架平铺于无菌纱布上。 
（7）将组织片移到组织支架上，平铺组织片，避免重叠和折叠，在纱布上吸去多余液体。 
（8）将组织支架快速浸入液氮，静置至少 5min。 
注意：在组织支架移入组织冻存管前，检查组织切片是否透明，透明的组织切片意味着组织切片成功被玻璃化。 
（9）拧开冻存管盖，用中号直头镊夹紧冻存管半进入液氮预冷 10 秒后，快速将组织支架移入冻存管内，旋上管盖。 
（10）将冻存管移入液氮罐中长期保存。