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  • T7 RNA 聚合酶

    • T7 RNA Polymerase
    货号: abs60153
    分子量: 99 kDa
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60153-50KU 现货 ¥5694.00
    - +
    abs60153-200KU 1-2周 ¥17940.00
    - +
    abs60153-1000KU 1-2周 ¥85631.00
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    产品描述
    描述

    T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是T7噬菌体DNA编码的酶,对T7启动子序列具有高度特异性 。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶,具有 5′→3′的RNA聚合酶活性,可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
    产品特点
    该酶对T7启动子具有高度特异性,不识别其它生物来源的启动子。可以识别修饰的核苷酸,例如生物素标记、荧光素标记、放射性同位素、地高辛标记dNTP,用于各种标记RNA的合成,进行下游实验。
    质量保证
    1、SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,毛细管电泳检测纯度在95%以上;
    2、酶动力学实时荧光法显示无DNA酶及RNA酶污染;
    3、光度测定法显示内毒素含量≤10 EU/mg。
    产品组成

    品名规格产品组成
    10 x Transcription BufferMg" (400 mM)T7 RNA Polymerase (1 KU/jiL)
    abs60153-50 KU50 KU150 μL100μL50 μL
    abs60153-200 KU200 KU500 μL500μL200 μL
    abs60153-1000 KU1000 KU1.25 mLx22 mL1 mL
    来源
    携带T7 RNA聚合酶基因的E. coli
    纯度

    ≥90%

    活性

    比活:1 KU/μL

    使用方法

    RNA体外转录合成】

    1、在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系;
    2、将上述反应液混合均匀,低速离心至管底,37℃孵育4 h。若转录本长度小于100 nt,增加反应时间至4~8 h;
    3、转录后取样品进行凝胶电泳,取样1 μL稀释到5 uL,然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测,以确定转录是否成功;
    4、反应完成后,加入DNase Ⅰ(RNase free),37℃孵育30 min以去除模板DNA。

    注:

    (1)为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。
    (2)反应体系于室温配置。由于10×Transcription Buffer 中含有亚精胺,低温下亚精胺浓度过高容易引起DNA模板沉淀,建议最后加入模板DNA。
    (3)建议在PCR仪中进行反应,为防止蒸发,建议开启热盖功能。
    (4)使用试剂、容器等无RNA酶污染。

    储存/保存方法

    -20 ℃以下保存。避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中,首次使用时建议进行分装产品有效期:12个月

     

    技术指标
    存储缓冲液:50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,20 mM β-ME,1 mM EDTA,50% 甘油,0.1% (w/v) Triton X-100,pH 7.9
    产品用途
    1、单链 RNA合成(包括mRNA、高特异性RNA探针、siRNA前体、gRNA前体等);
    2、合成的RNA可以用于或用作:杂交探针,基因组DNA序列分析,核糖核酸酶保护测定,反义RNA合成,作为 体外翻译的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用,核酸扩增分析,siRNA、 miRNA等小RNA。
    注意事项
    1、使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20 ℃保存;
    2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
    3、产品仅供研究使用。
    参考文献
    参考文献
    [1] Schenborn ET, Mierendorf RC Jr. A novel transcription property of SP6 and T7 RNA polymerases: dependence on template structure. Nucleic Acids Res. 1985;13(17):6223-6236. PMID: 2995921
    [2] Davanloo P, Rosenberg AH, Dunn JJ, Studier FW. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase. Proc Natl Acad Sci U S A. 1984;81(7):2035-2039. PMID: 6371808
    [3] Melton DA, Krieg PA, Rebagliati MR, Maniatis T, Zinn K, Green MR. Efficient in vitro synthesis of biologically active RNA and RNA hybridization probes from plasmids containing a bacteriophage SP6 promoter. Nucleic Acids Res. 1984;12(18):7035-7056.
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
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