SYBR High-Sensitivity qPCR SuperMix

本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。预混液中已经将DNA聚合酶、精心优化的反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起，是一种2×浓度的预混型试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分简单方便。

本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA 聚合酶，并结合精心优化的反应Buffer，具有更高的扩增灵敏度，反应特异性和扩增效率，能够在更宽广的范围内进行准确定量。

HotStart Taq DNA 聚合酶在 75℃以下温度没有活性， 从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活需要 95℃孵育 10 min。反应体系可在室温下配制，无需在冰上完成，操作方便。优化浓度的 SYBR Green I 荧光染料，特异性地掺入 DNA 双 链后，荧光信号增强，而不掺入链中 SYBR Green I 染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完 全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。 本产品为 2×预混化学修饰型荧光定量 PCR 反应体系，使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔与孔 之间产生的荧光信号误差，根据不同荧光定量 PCR 仪选择使用）和水，使其工作浓度为 1×，即可进行反应。具有快速简便、 灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约 PCR 实验操作时间、降低污染机率。
产品组分如下：

产品组成	1ml×5（规格）	1ml×25（规格）
2x SYBR high-sensitivity qPCR supermix	1ml×5	1ml×25
Rnase free water	1ml×5	1ml×23
Rox reference dye Ⅰ（ROX Ⅰ)	200ul	1ml
Rox reference dye Ⅱ（ROX Ⅱ)	200ul	1ml

使用：请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。建议反应体积为20～50μl。引物设计：一般为了增加敏感度及扩增效率且抑制非特异性反应，扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。
常用反应体系（20ul）

2x SYBR high-sensitivity qPCR supermix	10ul
上游引物	0.2-1.0uM（终浓度）
下游引物	0.2-1.0uM（终浓度）
模板	1-2ul
ROX（需根据机器型号选择）	0.4ul
Rnase free water	至20ul

常用PCR循环（两步法可获得高特异性，三步法可获得高扩增率）：

两步法扩增程序：

95℃	1min
35-45次循环	95℃，20s
	60℃，45s

三步法扩增程序：

95℃	1min
35-45次循环	95℃，20s
	50-60℃，45s
	72℃，30s

-20℃避光保存，一年有效期。2-8℃，保存3个月，避免反复多次冻融。