SYBR High-Sensitivity qPCR SuperMix
货号-规格 | 货期 | 价格 | 数量 |
abs60086-1mL×5 | 1-2周 | ¥945.00 | - + |
abs60086-1mL×25 | 1-2周 | ¥4200.00 | - + |
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- 实验方法 实验条件
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- qPCR实验重复性差的原因以及改进措施有?
- 加样体积失准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体积,将模板做高倍稀释,以大体积加入反应体系中。
- 定量PCR仪不同位置温度控制不一致:定期校准仪器。
- 模板浓度太低:模板浓度越稀,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。
- qPCR mix没有完全混匀:请使用前充分混匀。
- 扩增效率低可能的原因有?
- 反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。
- 反应条件不佳:适当降低退火温度或改为三步扩增法。
- 反应体系中有抑制物:一般为模板中引入,应先把模板适当稀释,再加入到体系中,减少抑制物的影响。
- 熔解曲线出现多峰可能的原因有?
- 非特异性扩增。
- 引物设计不佳:避免二聚体和发夹结构的出现。
- 引物浓度不佳:适当调整引物浓度。
- 退火温度低:提高退火温度。
- 模板中有基因组DNA的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的污染(DNaseI处理),或通过设计引物避免非特异性扩增。
- 阴性对照出现明显扩增的原因有?
- 反应体系组分(如水)被污染:实验过程中,更换新的Mix或者水重复实验。
- 标本间的交叉污染或产物污染:反应体系在超净工作台内配制,对实验室进行严格的区分,减少气溶胶污染;使用带滤芯的枪头。
- 引物二聚体的出现:引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
- 引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。在35循环后阴性对照出现扩增属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。
- Ct值出现过晚可能的原因?
- 扩增效率极低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计引物。
- 模板浓度太低:减少稀释度,重复实验。
- 模板降解:重新制备模板,重复实验。
- PCR产物太长:一般将PCR产物长度设计为100 bp-200 bp之间。
- 反应体系中存在PCR反应抑制剂:一般为加入模板时带入,导致模板质量不高,加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。
- qPCR无Ct值出现可能存在的原因以及相应改进措施?
- 检测荧光信号的步骤有误:一般染料法采用72℃延伸时采集,探针法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
- 引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。
- 模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
- 模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
- 反应循环数不够:一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环,但高于45个循环会增加过多的背景信号。
- The copper transporter, SLC31A1, transcriptionally activated by ELF3, imbalances copper homeostasis to exacerbate cisplatin-induced acute kidney injury through mitochondrial dysfunction
Zhimin Qiu, Qicen Liu, Ling Wang, Yingfen Xiong, Juan Wu, Meijian Wang, Xiluan Yan, Huangying Deng
Chemico-Biological Interactions. 2024 Apr 25 .
影响因子: 5.1
- Extracellular vesicle loaded with miR-494-3p can suppress ovarian cancer cell
Suli Wang, Banzhou Pan, Jingni Zhu, Ping Wang, Ke Li
JOURNAL OF DRUG DELIVERY SCIENCE AND TECHNOLOGY. 2023 Dec 16 .
影响因子: 5
- 血清lncRNA GASL1联合心脏彩超对慢性心力衰竭患者的预后价值
龙珠;金秋阳;黄静;詹洮;王洁
国际检验医学杂志. 2023 Nov 24 .
- Oncogenic β-catenin-driven liver cancer is susceptible to methotrexate-mediated disruption of nucleotide synthesis
Liu Fangming, Wu Yuting, Zhang Baohui, Yang Shuhui, Shang Kezhuo, Li Jie, Zhang Pengju, Deng Weiwei, Chen Linlin, Zheng Liang, Gai Xiaochen, Zhang Hongbing
CHINESE MEDICAL JOURNAL. 2023 Aug 23 .
影响因子: 6.1
- PDGFRB upregulation contributes to retinal damages in the rat model of retinal ischemia-reperfusion
Juanjuan Li, Chen Chen, Liwei Zhang, Yunling Ren, Hua Li
BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS. 2023 Apr 14 .
影响因子: 3.322
- β-catenin-IRP2-primed iron availability to mitochondrial metabolism is druggable for active β-catenin-mediated cancer
Wu Yuting, Yang Shuhui, Han Luyang, Shang Kezhuo, Zhang Baohui, Gai Xiaochen, Deng Weiwei, Liu Fangming, Zhang Hongbing
Journal of Translational Medicine. 2023 Jan 26 .
影响因子: 8.44
- Hu’po Anshen Decoction Accelerated Fracture-Healing in a Rat Model of Traumatic Brain Injury Through Activation of PI3K/AKT Pathway
Jing Shen, Yan-Ze Li, Sai Yao, Zhou-Wei Zhu, Xiang Wang, Hui-Hui Sun,Wei-Feng Ji
Frontiers in Pharmacology. 2022 Jul 18 .
影响因子: 5.988
- Engineered exosomes loaded with miR-494-3p suppress homologous ovarian cancer
Suli Wang, Ke Li
research square. 2022 Mar 22 .
- Knockdown of long non-coding RNA AGAP2-AS1 suppresses the proliferation and metastasis of glioma by targeting microRNA-497-5p
Yi Sun,Yulong Shen,Xing LiORCID Icon
Bioengineered. 2021 Oct 28 .
影响因子: 3.269