Site-directed Mutagenesis Kit

本试剂盒采用反向PCR（Inverse PCR）技术，对含有目标基因的双链环状质粒进行扩增，直接导入突变序列，从而实现单个或多个邻近碱基的突变（mutation）、缺失（deletion）、或插入（insertion）。首先以甲基化的质粒DNA为模板，使用人工合成含有目的突变碱基的引物进行扩增反应，然后用DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板，再进行转化和筛选。
    本试剂盒使用的 Enzyme及其配套buffer能够最大限度地保持扩增质粒的保真性，对引物设计的要求相对宽松、灵活，最多可实现21个连续碱基的插入或删除。该方法操作简单快捷，突变阳性率高，严格按说明书操作，6个以下连续碱基的突变率可达90%以上。
    本试剂盒适用于≤6 kb质粒的点突变。对于6 kb以上的质粒，推荐使用我公司的abs60099.html" data-v-6936776b="">XL Site-directed Mutagenesis Kit（abs60099）。对于非甲基化的质粒（例如从大肠杆菌JM110或SCS110菌株中提取的质粒），可通过转化dam＋ 的大肠杆菌菌株（如DH5α、TOP10、JM109、XL1-Blue等），再抽提获得甲基化的质粒作为PCR反应模板。
    本试剂盒提供一个4.5 kb、含有突变的lacZ基因的对照质粒（Control Plasmid）。质粒转化大肠杆菌后在含Amp、IPTG和X-gal的琼脂平板上呈白色菌落；采用试剂盒提供的Control Primers成功进行突变反应后，菌落呈现蓝色，可据此检测突变效率。
产品信息：

组分	规格
Enzyme	8ul
10 x  Reaction Buffer	100ul
High-GC Additive	30ul
dNTPs	25ul
Dpn I (10 U/ul)	12ul
Control Plasmid (5 ng/ul)	10ul
Control Primers (10 uM of each)	10ul
ddH2O	1ml

注意：除Buffer和ddH₂O外，其他组分使用前请先短暂离心；10 x  Reaction Buffer使用前请完全解冻并充分混匀。

-20℃保存，保质期12个月。