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  • Single Cell Whole Genome Amplification Kit

    货号: abs60071
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60071-10次 1-2周 ¥2079.00
    - +
    abs60071-50次 1-2周 ¥9440.00
    - +
    大包装询价
    产品描述
    描述

    单细胞全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系,Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性,可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力,可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性,保真度高于绝大多数高保真酶,因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。

    本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增,一个反应可以达到40μg的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的最终产量,如果以DNA样品为模板,需避免使用降解的DNA作为起始模板。 

    产品特点:

    高覆盖度:经过扩增后可达到95%以上的覆盖度。

    高均一度:无偏好扩增,可实现全基因组的均一扩增。

    高保真:具有很强的校正功能,保真度高。

    高灵敏:可实现从单个细胞样本的全基因组扩增。
    产品组分:

    组分名称

    10次

    50次

    Cell Lysis Buffer

    1ml

    1ml×5

    Neutralization Buffer

    1ml

    1ml×5

    Reaction Buffer

    1ml

    1ml×5

    GenomiPhi Buffer

    250ul

    1.25ml

    GenomiPhi29 Enzyme(10U/ul)  

    50ul

    250ul

    ddH2O

    1ml

    1ml×5


    实验方法:

    适用于以 1-1000 个新鲜配制的细胞样品作为模板,以保证起始基因组的完整性。

    (1)将细胞用 PBS 洗涤三次。

    (2)取一倍体积的细胞,加入一倍体积的 Cell Lysis Buffer,轻轻混匀(勿涡旋混匀)后置于冰上放置 10min。

    (3)加入一倍体积的 Neutralization  Buffer,轻轻混匀,勿涡旋混匀。

    (4)从上述混合液中取 3μl 样品,加入 7μl 无菌水,10μl Reaction Buffer。如果不进行后续反应,需冰上放置。

    将 20μl 上 述 处 理 后 的 样 品 加 入 到 25μl GenomiPhi Buffer 中。

    (5)加入 5μl GenomiPhi29 Enzyme,30℃反应3h。

    (6)65℃,10min 失活 GenomiPhi29 Enzyme。

    (7)扩增产物是高浓度基因组 DNA,需要将扩增产物用无菌水或者 TE 缓冲液进行稀释后进行下游实验。

    储存/保存方法
    -20℃
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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