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  • sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit

    货号: abs60161
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    abs60161-30次 1-2周 ¥2552.00
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    产品描述
    描述

    CRISPR/Cas9是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA指导Cas9蛋白对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR/Cas9的切割是通过向导RNA(gRNA)与打靶基因组位置之间~20bp碱基的配对,且打靶序列的3′端需要有PAM结构(NGG),再引导Cas9作用实现的。CRISPR/Cas9与靶位点识别的特异性主要依赖于gRNA与靠近PAM处10-12bp碱基的配对,而其余远离PAM处8~10bp碱基的错配对靶位点的识别影响不明显,这导致了CRISPR/Cas9存在一定的脱靶性,可能发生非特异性切割,引起基因组非靶向位点的突变,这样会造成研究结果的不确定性以及研究工作量的大量增加。

    CRISPR/Cas9基因编辑系统能有效解决这一问题。sgRNA体外转录试剂盒(abs60162)能体外高效转录不同的sgRNA片段,进一步通过sgRNA体外筛选试剂盒(abs60161)筛选出高效率的sgRNA,用于后续科研实验。
    产品组分:

    组分名称

    体积

    Cas9 Nuclease(1ug/ul)       

    60ul

    10×Reaction Buffer

    60ul

    2×Amplification Mix

    1ml

    1.5Kb Target DNA
    Control(50ng/ul)

    20ul

    Control sgRNA(1μ g/ul)

    20ul

    RNase Free Water

    1ml

    实验方法:

    提取基因组DNA,设计引物使用2×Amplification Mix PCR扩增得到含有编辑位点的目的片段后进行体外切割。

    体外切割系(20μl):

    1.5Kb Target DNA Control

    200ng

    Control sgRNA

    200ng

    Cas9 Nuclease

    0.5-1ul

    10×Reaction Buffer

    2ul

    RNase Free Water

    至20ul


    37°C反应1h,70°C加热10min终止反应。琼脂糖胶电泳检测。

    储存/保存方法
    -20℃保存,或-80℃长期保存。
    产品用途
    基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除; 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入; sgRNA 剪切靶点 DNA 的效率检测,降低体内筛选成本; 体外剪切靶 DNA 的特异位点; DNA 编辑后基因型鉴定。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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