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  • 内切酶SgeI

    货号: abs60244
    产品说明书
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    abs60244-250U 现货 ¥200.00
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    产品描述
    描述
    爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
    识别位点:
    5'...m5 C N N G(N)9 ↓ ...3'
    3'... G N N C(N)13↑...5'*
    *SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列,一条链或双链甲基化均可被识别。
    产品组分:
    名称规格
    Sgel (5U/μl)50 μl
    10×Sgel Buffer1 ml
    使用方法
    1. DNA 酶切流程
    ① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
     DNA
    ddH2Oto 20 μl
    10× Sgel Buffer2 μl
    底物 DNA2 μl (0.5-2 μg)
    SgeI0.2-1 μl
    Total20 μl
    注:反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过 1 h。
    ② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
    ③ 37℃温育 1 h;
    ④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。

    甲基化修饰影响:
    DamDcmCpGEcoKIEcoKI
    无影响总是切割被 Dcm 甲基转移酶甲基化的 DNA切割与 CpG 甲基化序列重叠的靶点无影响无影响
    储存/保存方法
    -20℃,有效期2年。
    技术指标
    建议反应条件:
    1× Sgel 缓冲液;
    37℃温育;
    参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
    失活条件:
    80℃温育 20 min。
    酶活定义:
    在 1×SgeI Buffer 条 件 下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反应体系中 37℃孵育 1 h,不断增加酶量,直至酶切产物 DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为 1 U。
    质量控制:
    核酸内切酶残留检测:
    将 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
    核酸外切酶残留检测:
    将 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。 
    注意事项
    1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。
    2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的 DNA 产物会促进 SgeI 的非特异性酶切,因此建议酶切时优化 SgeI 酶量用于酶切反应。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
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