产品描述 | |||||||||||||||||||||||
描述 | 爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。 识别位点: 5'...m5 C N N G(N)9 ↓ ...3' 3'... G N N C(N)13↑...5'* *SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列,一条链或双链甲基化均可被识别。 产品组分:
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使用方法 | 1. DNA 酶切流程 ① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴; ③ 37℃温育 1 h; ④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。 甲基化修饰影响:
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储存/保存方法 | -20℃,有效期2年。 | ||||||||||||||||||||||
技术指标 | 建议反应条件: 1× Sgel 缓冲液; 37℃温育; 参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。 失活条件: 80℃温育 20 min。 酶活定义: 在 1×SgeI Buffer 条 件 下,1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反应体系中 37℃孵育 1 h,不断增加酶量,直至酶切产物 DNA带型不随着酶量的增加而发生变化,此时酶量定义为 1 U。 质量控制: 核酸内切酶残留检测: 将 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。 核酸外切酶残留检测: 将 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。 | ||||||||||||||||||||||
注意事项 | 1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。 2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量,另外由于识别位点酶切产生的 DNA 产物会促进 SgeI 的非特异性酶切,因此建议酶切时优化 SgeI 酶量用于酶切反应。 | ||||||||||||||||||||||
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究 |
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