内切酶SgeI

爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。
识别位点：
5'...m5 C N N G(N)₉ ↓ ...3'
3'... G N N C(N)₁₃↑...5'*
*SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列，一条链或双链甲基化均可被识别。
产品组分：

名称	规格
Sgel (5U/μl)	50 μl
10×Sgel Buffer	1 ml

1. DNA 酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

	DNA
ddH2O	to 20 μl
10× Sgel Buffer	2 μl
底物 DNA	2 μl (0.5-2 μg)
SgeI	0.2-1 μl
Total	20 μl

注：反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过 1 h。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
③ 37℃温育 1 h；
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

甲基化修饰影响：

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoKI
无影响	总是切割被 Dcm 甲基转移酶甲基化的 DNA	切割与 CpG 甲基化序列重叠的靶点	无影响	无影响

-20℃，有效期2年。

建议反应条件：
1× Sgel 缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。
失活条件：
80℃温育 20 min。
酶活定义：
在 1×SgeI Buffer 条 件 下，1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反应体系中 37℃孵育 1 h，不断增加酶量，直至酶切产物 DNA带型不随着酶量的增加而发生变化，此时酶量定义为 1 U。
质量控制：
核酸内切酶残留检测：
将 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测：
将 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。 

1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。
2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的 DNA 产物会促进 SgeI 的非特异性酶切，因此建议酶切时优化 SgeI 酶量用于酶切反应。