RIPA裂解液(弱)
- RIPA Lysis Buffer (Weak)
货号-规格 | 货期 | 价格 | 数量 |
abs9230-100ml | 现货 | ¥378.00 | - + |

产品描述 | |
描述 | 本品为裂解性较温和的1×RIPA 裂解液,主要成分为50mM Tris-HC(l pH 7.4),150mM NaCl,1%NP-40,0.25%脱氧胆酸钠,以及正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,经 本品裂解所得的蛋白样品,适用于蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀(Co-IP)等实验 。 |
使用方法 | (一)贴壁培养细胞 1、取 Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入 PMSF,使 PMSF 终浓度为 1mM。 2、去除贴壁细胞的培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液清洗 1 次,低速离心,弃上清,留取沉淀。 3、按照 6 孔板每孔加入 150~250μL 裂解液的比例, 加入 Weak RIPA Lysis Buffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解,通常裂解液作用于细胞 1~3s 内,细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μL 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μL。 4、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 5、后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (二)悬浮培养细胞 1、取 Weak RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀后,加入 PMSF,使 PMSF 终浓度为 1mM。 2、低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。 3、用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150~250μL 裂解液的比例,加入 Weak RIPA Lysis Buffer 。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μL 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μL。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 4、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (三)组织样本 1、取 Weak RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后,加入 PMSF,使 PMSF 终浓度为 1mM。 2、把组织剪切成细小的碎片,越小越好。 3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在 1~2min 之内,以减少蛋白的降解。 4、按照每 20mg 组织加入 150~250μL 裂解液的比例,加入裂解液。冰上或 4℃裂解 15~30min。 5、步骤 3、4 亦可以采用如下过程:按照每 20mg 组织加入 150~250μL 裂解液的比例,加入 Weak RIPA Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在 1~2min 之内,以减少蛋白的降解。 6、10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。 7、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 |
注意事项 | 1、去除贴壁细胞的培养液时,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。 2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。 3、如果细胞量较多,必须分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。 4、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 Vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 5、溶解 RIPA 裂解液时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。 6、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NF-KB、p53 等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 7、细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。 8、为了您的安全和健康,请穿戴好个人防护装备和服装进行操作。 |
基本信息 | |
储存/保存方法 | -20℃,有效期12个月。 |
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究 |
- 实验方法 实验条件
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- RIPA裂解液网站有强中弱三种,该如何选择?
- 请见下表参数对比
产品名称 RIPA 裂解液(强) RIPA 裂解液(中) RIPA 裂解液(弱) 货号 abs9229 abs9228 abs9230 有效裂解成分 1%Triton X-100, 1% NP-40, 1% NP-40, 1% sodium 0.5% sodium 0.25% sodium deoxycholate, deoxycholate,deoxycholate0.1% SDS0.1% SDS裂解强度强中温和膜蛋白提取很好较好一般胞浆蛋白提取很好很好很好核蛋白提取很好较好较好主要用途WB,IPWB,IPWB,IP,CO-IP
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