首页 产品中心
  • RIPA裂解液(强)
  • RIPA Lysis Buffer (Strong)
  • 货号: abs9229
    产品说明书
    分享:
    货号-规格 货期 价格 数量
    abs9229-100ml 1-2周 ¥378.00
    - +
    大包装询价
    产品描述
    描述

    RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer),本意为 Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对组织和细胞都有较好的裂解作用。RIPA 的配方有很多种,根据其裂解强度的不同,大致可分为强、 中、弱三类,应用上会有一些差异。

    本品为裂解性较强的 1×RIPA 裂解液,主要成分为 50mM Tris-HCl (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% 脱氧胆酸钠,0.1% SDS,以及正钒酸钠,氟化钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白 降解,经本品裂解所得的蛋白样品,适用于蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂,不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。
    产品组分

    组分名称规格
    AARIPA Lysis Buffer (Strong)100ml
    BPMSF(100mM)1.5ml
    外观
    溶液
    使用方法
    一、培养的细胞样品
    1、充分融解RIPA裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(分子量:174.2 g/mol),使其最终浓度为1mM。
    2、贴壁细胞:吸除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可忽略此步)。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加量。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
    悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
    3、充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
    【裂解液用量说明】:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
    二、组织样本
    1、将组织剪切成细小的碎片,使用匀浆仪进行匀浆。
    2、充分融解RIPA裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(分子量:174.2 g/mol),使其最终浓度为1mM。
    3、按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意:如果裂解不充分可以适当添加用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可适当降低用量。】
    4、充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫沉淀等实验。
    5、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过高强度的漩涡混匀器使样品裂解充分,之后使用相同步骤操作。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解的足够充分。
    【注意】:RIPA裂解液的裂解产物经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散这些透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。像检测一些常见的转录因子,例如NF-kB、p53,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
    注意事项
    1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
    2、RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为
    含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可
    以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过
    超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。
    3、不同的细胞需要加入的裂解液的量可能会不同,需要根据具体条件进行条件筛选;
    4、若裂解液产生沉淀或者析出,可在 37℃水浴中孵育,振荡使沉淀或析出物溶解,若不能
    溶解,可适当加热助溶。
    5、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
    基本信息
    别名
    RIPA Lysis Buffer (Strong)
    概述
    储存/保存方法
    -20℃保存,有效期12个月
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
        提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
        提交不成功?请联系info@absin.cn。
        我要提问
    • RIPA裂解液网站有强中弱三种,改如何选择?
    • 请见下表参数对比
      产品名称    RIPA 裂解液(强)    RIPA 裂解液(中)    RIPA 裂解液(弱)
      货号 abs9229 abs9228 abs9230
      有效裂解成分 1%Triton X-100, 1% NP-40, 1% NP-40,
      1% sodium 0.5% sodium 0.25% sodium
      deoxycholate,
      deoxycholate,
      deoxycholate
      0.1% SDS
      0.1% SDS
       
      裂解强度
      温和
      膜蛋白提取
      很好 较
      较好
      一般
      胞浆蛋白提取
      很好
      很好
      很好
      核蛋白提取
      很好
      较好
      较好
      主要用途
      WB,IP
      WB,IP
      WB,IP,CO-IP

    促销资讯 更多

      订购信息
      您可以从我们的授权经销商处购买absin产品或获得技术支持。若要查看您所在地区的经销商,请从以下的下拉列表中选择。
      GO
      • 0