首页 产品中心
  • 2×Pfu Master Mix(Quick Load)

    货号: abs60055
    产品说明书
    分享:
    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60055-1ml 1-2周 ¥137.00
    - +
    abs60055-1ml×5 1-2周 ¥588.00
    - +
    大包装询价
    产品描述
    描述

    本产品为预混的含有优化浓度的
    GenStar高纯度 Pfu DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液以及稳定剂 等成分的即用型2倍浓度的PCR溶液,适用于对保真性要求较高的DNA片段的扩增,也可用于DNA片段的末端补平。本产品具有快速简便、灵敏度高、稳定性好等优点,使用时只需加入DNA模板和引物,并用水补足体积,可最大限度地减少人为误差、节约时间、降低污染几率。PCR产物无3’-A突出碱基,不可直接用于TA克隆。

    产品组分:

    产品组成体积
    2×Pfu Master Mix1ml
    使用方法
    用户需自备的试剂:
    DNA模板、引物。
    注:所有组分应仔细混匀并离心后开启,所有 PCR操作过程应在冰上进行。
    操作示例:以50 μl PCR反应体系为例 。

    1. 按照下表配制 PCR反应体系
    组分体积
    DNA模板*XμL
    正向引物(10μM)1μL
    反向引物(10μM)1μL
    2×Pfu Master Mix25μL
    ddH2O补足至50μL

    *模板量:10-1000ng基因组 DNA 1-30 ng质粒 或 1-2 μl RT-PCR反应后的 cDNA。
    注:以上举例为常规PCR反应系统,仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异,需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。

    2. PCR反应循环的设置

    流程温度时间 
    预变性94℃2min 
    变性
    退火
    延伸
    94℃
    55-65℃
    72℃
    30s
    30s
    2min/kb
    25-35循环
    终延伸72℃5-10min 

    3. 结果检测:取 2-5 μl反应液电泳观察结果 。


    【补充说明】
    1. Pfu DNA Polymerase具有 3’→5’的外切酶活性,故扩增时延伸速度比 Taq DNA Polymerase低,约为 2 min/kb,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间。
    2. 采用2×Pfu PCR Master Mix扩增时,引物长度应大于18个碱基,Tm在 55-60℃之间,引物浓度在 0.1-0.5 μM之间,使用的引物浓度应比Taq酶略高。
    3. Pfu DNA Polymerase比Taq DNA Polymerase的热稳定性好, 95℃下1h仍可保持 90%以上的活性。 因此对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到 98℃,对 Pfu DNA Polymerase的活性无影响。
    4. 2×Pfu PCR Master Mix对质粒DNA模板的扩增上限为10 kb,基因组DNA模板的扩增上限约为 6 kb。 但通常 Pfu DNA Polymerase对 2kb以上片段的扩增效率会明显降低。
    储存/保存方法
    -20℃
    产品用途
    用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
    注意事项
    1、需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
    2、应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足。循环数过多,扩增量增加,但突变率会增加,并造成非特异性扩增。
    3、根据引物Tm值设置合适的退火温度,退火温度过低,会造成非特性扩增。退火温度过高,可能扩增不到目的条带。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
      0张,还能上传 8 提交
          提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
          提交不成功?请联系info@absin.cn。
          我要提问

      促销资讯 更多

        订购信息
        您可以从我们的授权经销商处购买absin产品或获得技术支持。若要查看您所在地区的经销商,请从以下的下拉列表中选择。
        GO
        • 0