首页 产品中心
  • pBM27 Toposmart快速克隆试剂盒

    货号: abs60096
    产品说明书
    分享:
    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60096-20T 1-2周 ¥714.00
    - +
    abs60096-20T×3 1-2周 ¥1890.00
    - +
    大包装询价
    产品描述
    描述
    利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM27载体中。适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。pBM27载体类似于invitrogen公司的pENTR/D-TOPO入门载体,具有attL1和attL2,为gateway系统中的入门载体。引物M13F(-21)和M13R可用于菌落PCR和测序鉴定。
    产品特点:
    1、连接反应仅需5分钟;
    2、只适合平末端PCR产物的快速、高效、定向克隆;
    3、载体采用了新的制备工艺,零背景,无需蓝白斑筛选;
    4、可在基因的C端中融合Flag标签序列;
    5、载体为壮观霉素抗性。
    产品信息:
    组分20T20T ×3
    pBM27 Vector (20ng/ul )20 ul20 ul×3
    10×Toposmart20 ul20 ul×3
    Control Insert EGFP5 ul5 ul
    M13F(-21) Primer(使用前加入60ul ddH2O)0.1OD0.1OD×3
    M13R Primer(使用前加入60ul ddH2O)0.1OD0.1OD×3
    储存/保存方法
    -20℃保存,有效期12个月。
    注意事项
    1、引物要求:PCR引物5’端不能进行磷酸化修饰,普通商业化引物即可。上游引物的5’端添加CACC四个碱基(CACC为真核表达所必需的Kozak序列)。如果目的蛋白需要在C端带FLAG标签,下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子(3个碱基),目的蛋白的翻译终止由FLAG标签的终止密码子TAA(位于Xho I酶切位点前)来实现。
    2、DNA聚合酶:选用Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD和Xerox 等高保真DNA聚合酶用于PCR扩增。
    3、连接时间:5-15分钟,一般为15分钟。
    4、连接温度:室温 (22℃-37℃),可使用PCR仪控温。最佳反应温度为25℃。若片段有高GC等复杂结构,可在37℃反应。
    5、产物要求:为保证PCR产物完整,建议72℃后延伸5-10分钟。连接前使用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的质量和纯度,如PCR产物为非单一性条带,目的片段一定要切胶回收。如PCR产物为单一条带,无引物二聚体,可以取1-3ml的PCR产物直接连接。
    但若扩增模板为质粒DNA,应注意质粒的抗性。由于pBM27载体为壮观霉素抗性,以壮观霉素抗性的模板质粒扩增的PCR产物应切胶回收后再连接。
    6、片段用量:胶回收的DNA片段一般使用量为50-100ng。对照片段为5’端带CACC四个碱基的全长EGFP基因的平末端产物。
    7、往M13F(-21)和M13R引物干粉管加120ml灭菌水即为5mM浓度的引物。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
      0张,还能上传 8 提交
          提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
          提交不成功?请联系info@absin.cn。
          我要提问

      促销资讯 更多

        订购信息
        您可以从我们的授权经销商处购买absin产品或获得技术支持。若要查看您所在地区的经销商,请从以下的下拉列表中选择。
        GO
        • 0