胰酶

传统胰酶一般取自猪的胰脏，胰脏中除了胰蛋白酶，还有其他蛋白酶，产品不可避免的会有其他杂质。 与传统提取的胰蛋白酶比较，重组胰蛋白酶具有的产品优势如下：

（1）无动物源性：基因重组胰酶是由重组大肠杆菌表达生产，产品不含任何动物来源组分。

（2）纯度高：无其它的杂酶污染。

（3）稳定：室温下即可稳定保存，无需冷冻。

胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对纤维性组织和较硬的癌组织的效果差。胰酶的消化效果主要与pH值、温度、时间、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。

酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明：酚红可以模拟固醇类激素（特别是雌激素）的作用。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，建议用不含酚红的培养基。由于酚红干扰检测，在做流式细胞检测时，也会使用不含酚红的胰酶。

多次使用同一瓶胰酶且反复冻融，会降低消化效果并有可能造成污染，因此有必要对胰酶进行分装。胰酶分装时遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则，因为冷冻保存时，试剂体积会膨胀。

（1）消化时间不够
（2）吹打力度不够
（3）胰酶消化液浓度不够
（4）胰酶保存不当已失效
（5）细胞密度过高之后才消化传代。

Annexin V（膜联蛋白）是Ca²⁺依赖的蛋白，EDTA会螯合Ca²⁺从而影响Annexin V，进而影响结果，因此选用不含EDTA的胰酶。

本公司在生产过程中将胰酶进行3次100nm孔径过滤器过滤并进行辐照。在质量控制中，胰酶需要经过无菌检测，猪细小病毒检测和支原体检测，以确保产品质量和安全性。

一般消化时间控制在5分钟以内，若出现消化过久问题，有可能胰酶保存不当已经失活。建议将大瓶胰酶分装后冻存；使用前最好37℃水浴或培养箱回温；使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞；依据不同细胞种类调整胰酶用量和消化时间及温度。

消化条件不稳定会导致黏附力低的细胞被消化下来并进入传代培养，黏附力强的细胞可能无法顺利被消化而丢失，造成人工筛选细胞的过程。因此，在摸索好合理的消化条件后，应保持恒定的胰酶用量、消化时间及温度，避免细胞被筛选。

血清终止的原理是竞争抑制，就是用过量的牛血清中含有的蛋白来与胰酶结合，不给胰酶消化细胞蛋白的机会。

胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽键，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力作用下成为球形。

图1. 胰酶酶切位点