溶液

试剂准备：
裂解液制备：临用前，取适量的 Western 及 IP 细胞裂解液，在其中分别加入 1%裂解液 B、C， 混匀后使用。
使用说明：
一、对于培养细胞样品：
1、对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没 有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200µL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下， 使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后，细胞就会被裂解。
2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200µL 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多，必需分装成 5~10×10⁵ 细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少 量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。
注：裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 100µL 裂解液已足够，但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量至 150µL 或 200µL。
二、对于组织样品：
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、按照每 20mg 组织加入 100~200µL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
3、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
4、充分裂解后，10000~14000g 离心 3~5min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。
5、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品 裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆 器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
2、为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。

Lysis Buffer for WB/IP Assays；Western及IP细胞裂解液

细胞裂解液A保存于2~8℃，B、C保存于-20℃。有效期12个月。