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  • 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液
  • Lysis Buffer for WB/IP Assays;Western及IP细胞裂解液
  • 货号: abs9116
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    abs9116-100ml 现货 ¥378.00
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    产品描述
    描述

    本免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液,主要成分为 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品,适用于 PAGE,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质,不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。

    产品组分

    组分 品名 包装
    A组分 细胞裂解液 100mL
    B组分 抑制剂 1mL
    C组分 PMSF 1mL
    外观
    溶液
    使用方法
    试剂准备:
    裂解液制备:临用前,取适量的 Western 及 IP 细胞裂解液,在其中分别加入 1%裂解液 B、C, 混匀后使用。
    使用说明:
    一、对于培养细胞样品:
    1、对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没 有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200µL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下, 使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后,细胞就会被裂解。
    2、对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200µL 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多,必需分装成 5~10×105 细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少 量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
    3、充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。
    注:裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 100µL 裂解液已足够,但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量至 150µL 或 200µL。
    二、对于组织样品:
    1、把组织剪切成细小的碎片。
    2、按照每 20mg 组织加入 100~200µL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
    3、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    4、充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。
    5、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品 裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆 器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
    注意事项
    1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
    2、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
    基本信息
    别名
    Lysis Buffer for WB/IP Assays;Western及IP细胞裂解液
    概述
    储存/保存方法
    细胞裂解液A保存于2~8℃,B、C保存于-20℃。有效期12个月。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
        提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
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