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  • 免疫印迹及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)
  • Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors)
  • 货号: abs9239
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    abs9239-100ml 1-2周 ¥378.00
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    产品描述
    描述

    Western及IP细胞裂解液,是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时,用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。
    Western及IP细胞裂解液的主要成分为Tris-HCl,NaCl,去垢剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
    使用本裂解液获得的蛋白样品,如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测,需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响,则可以使用本裂解液。
    用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质,不能用Bradford法测蛋白浓度。 

    使用方法
    1、对于培养细胞样品
    (1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
    (2)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后,细胞就会被裂解。
    (3)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5~10×105 细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
    (4)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
    注:裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加100uL 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。
    2、对于组织样品
    (1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
    (2)把组织剪切成细小的碎片。
    (3)按照每 20mg 组织加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
    (4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    (5)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
    (6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
    基本信息
    别名
    Lysis Buffer for WB/IP Assays (Without Enzyme Inhibitors)
    概述
    储存/保存方法
    -20℃冻存,1年稳定。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
        提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
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