全部产品
搜索
批量查询
登录
购物车 0
中文
  • 首页
  • 产品中心
  • 学习专区
  • 一站式采购
  • 定制服务
  • 促销中心
  • 试用中心
  • 技术资源
  • 关于我们
服务热线： 021-38015121
首页 产品中心
Human IL-1β ELISA Kit
  • Human IL-1β ELISA Kit
产品说明书
分享

  • Human IL-1β ELISA Kit

    金牌 买ELISA送京东卡
    货号-规格 货期 价格 数量
    abs510002-96T 现货 ￥2000.00
    - +
    大包装询价
    订购信息:
    您可以从我们的授权经销商处购买absin产品或获得技术支持。若要查看您所在地区的经销商，请从以下的下拉列表中选择。
    确定
    产品介绍 商品评论 FAQ 引用文献(11) 相关视频 相关文档 相关产品
    温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
      共 0 张，还能上传 8 张 提交
          提示： 尊敬的客户您好，如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的，可以点击“我要咨询”按钮填写您的疑问。
          提交不成功？请联系info@absin.cn。
          我要咨询
      • 问 如果我的样本是组织，有推荐处理组织样本的protocol吗？
      • 答 我们的ELISA试剂盒做组织样本，具体裂解方式参考如下：
        1、裂解液配置：建议选择：组织/细胞裂解液 (多因子检测)（abs9225）裂解液，在使用前按100:1的比例加入广谱型 
              蛋白酶抑制剂混合物（不含EDTA，100×DMSO储液）（abs9161），配置成工作液，现配现用；
        2、称量组织，按每10mg加入100ul裂解液工作液进行裂解针对组织，利用组织处理器或者其他组织处理装置，处理
              样本，保证样本处理完全；
        3、将裂解收的样品10000-14000rpm，4℃离心10min，取上清（建议组织裂解液离心两次）；
        4、取上清做BCA总蛋白浓度测定，完成后续操作。BCA法测量蛋白浓度请参考BCA 蛋白定量试剂盒（abs9232）说明
              书；
        5、根据测定的蛋白浓度，将样本稀释成总蛋白浓度为1μg/μl左右即可进行ELISA实验（部分指标需根据预实验结果再
              行调整）。
      • 问 ELISA数据处理有专门的软件吗？
      • 答 有，可以到如下链接下载免费版软件，点击下载。
      • 问

        同一样品多次活性测试结果差异大怎么解决？

      • 答

        样本保存不当，会导致多次实验结果偏差较大，样本应尽量减少反复冻融，如需多次检测，需在取样后分装保存。

      • 问

        检测样本是细胞培养上清，那么细胞数目对炎症因子的浓度有影响吗？

      • 答

        有影响，所以不同样本可以比较的前提条件是培养细胞数水平接近一致。

      • 问

        请问标曲是每次都要做吗？

      • 答

        是的，每次实验，孵育时间，洗板次数等等条件均不一样，不同实验的标曲不能混用，做一次实验需要做一次标准曲线，并且用当次，同一块板上的标准曲线结果去计算板内样品的浓度，才能得到准确的结果。

      • 问

         做预实验时每种要做几个复孔呀？

      • 答

        预实验视情况而定，如果整个板子孔数较为充足，建议两个复孔，如不充足，单孔也可以。要尽量保证实验过程中加样准确。

      • 问

        血清样本少量溶血，颜色稍深，对结果有影响吗？

      • 答

        会有影响，建议取样时需注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。

      • 问

        试剂盒有推荐稀释浓度还需要自己测吗？

      • 答

        试剂盒一般会给出不同样品的推荐稀释比例，但是为大致范围，最好还是根据自己的样本情况，设计预实验测量计算。

      • 问

        加完终止液之后测的几次数据差别也蛮大？

      • 答

        加完终止液后，显色反应也不是永远停止，形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深，建议在15 min内读数。

      • 问

        复孔差别比较大，是没洗干净吗？

      • 答

        复孔值差异较大，主要原因应考虑加样是否准确，洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。

      • 问 配好的抗体没用完如何保存，可保存多久？预实验用了一个试剂盒里面的部分板子和试剂，剩下的板子和试剂还能继续用于正式实验吗？
      • 答

        一般来讲，配好的母液，可以在四度保存，最多一个月左右。剩下的板子和试剂是可以继续用于正式实验的，间隔时间不要太长，一个月之内均可，需注意试剂避免污染，板子保持干燥。

      • 问

        最后显示的OD值在多少之间属于可用值，有要求吗？

      • 答 有的，为保证标曲的线性范围，建议最好标曲最高点OD值在0.8-3之间，同时，线性（四参数拟合）较好，副孔值CV值较低（15%以下）时，结果可用。
      • 问

        样本总是在标准曲线之外，稀释100倍也是，怎么办？

      • 答

        在设置稀释倍数之前，需要参考相关文献，对于一些表达极高的蛋白，确实会出现这种情况，建议继续提高稀释比例。

      • 问

        试剂盒推荐用450和540nm双波长检测，但条件有限可否换成450和620的双波长？如何使用校准波长？还有，用空白孔校准可以么？

      • 答

        可以的，TMB底物显色后，吸光峰值在450nm，另外的校准波长是防止气泡等杂质造成的干扰设置，避开450左右50nm以上即可。两次读取的OD值，用OD450 - OD校准波长即可。尽量还是建议有条件的选用双波长校准的方法，因为避免了不同孔的读数影响，防止出现空白孔污染，导致读数较高，无法校准的情况。

      • 问

        ELISA可以检测胞内蛋白么？

      • 答

        可以的，选用支持组织匀浆的ELISA试剂盒即可，将组织样品或细胞样品进行裂解，提取胞内蛋白后进行蛋白定量，保证每孔上样总蛋白量一致即可。

      • 问

         整个过程需要避光吗？避光需要避到什么程度呢？

      • 答 ELISA实验中，在酶标抗体孵育，以及显色底物孵育这两步建议避光，其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹，或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。
      • 问

        标准曲线在推荐的浓度下，r值为0.9，做了多次都是这样，怎么办？

      • 答

        要仔细核对产品说明书，看是否用了推荐的拟合方法，如爱必信的ELISA试剂盒，需要使用四参数拟合方式进行拟合，用错拟合方式，会导致r方值较低；如拟合方式无误，需检查是否有个别标曲孔数值异常，排查实验中是否出现污染或倍比稀释时出现失误。

      • 问

        封板膜什么时候用？每次加液后都要换吗？

      • 答

        封板膜在孵育样品、检测抗体以及HRP酶标抗体是，都要盖好封板膜，减少挥发及污染几率。每次使用后要更换新的封板膜。

      • 问

        手动洗板过程中，拍过抗体或抗原的滤纸需要扔吗？

      • 答

        是需要更换的，防止造成交叉污染，影响实验结果的准确性。

      • 问 有的wash buffer析出结晶后在37℃也不溶解，怎么办？
      • 答

        可提高至55度，并多次摇晃。溶解后按比例稀释即可使用。

      • 问

        测得的值都低于标准曲线的最低值，是什么原因，应该怎么解决？

      • 答

        基质效应导致，由于样本的基质环境相对于试剂盒中的稀释液更为复杂，可能存在部分成分抑制HRP酶活性，在样本中待测蛋白表达极低，甚至不表达的时候，OD值低于稀释液的值是存在的，按照0计算即可。首先是检查样品是否稀释倍数过高，降低稀释比，直至直接加样本原液，如还检测不出，需排查原因，建议在实验组别设置中添加阳性对照孔，用明确表达的样品作为阳性对照，如果标准曲线及阳性样品均可测得正常的表达浓度，则表明实验成功，其余待测样品表达含量低于检测下限，按照0计算即可。这种情况尤其对于炎症因子较为常见，在健康样本中，表达含量极低。

      • 问

        因为检测限的原因，同一块ELISA板子，部分样本稀释，部分样本1:10稀释，部分1:20稀释，这样设置可行吗？结果可以比较吗？

      • 答 可以比较，不同稀释比例，是因为不同样本间的表达差异较大，只要保证稀释后的检测样品测量值准确，还原回稀释倍数后的浓度是可信的。可以用来比较不同样本的原始浓度差。
      • 问

        试剂盒里面有捕获抗体么？

      • 答

        即用型ELISA试剂盒中，捕获抗体已经预包被至试剂盒中的ELISA板上，没有单独的捕获抗体提供，直接使用ELISA板孵育稀释后的样本及标准品即可。

      • 问

        ELISA实验中，检测计算抗原的浓度，临界值怎么确定？

      • 答

        根据曲线测定的浓度，建议落在标准曲线的中间位置较好，极限最好不要超过标准曲线的上下限，如果超出较多，会影响计算结果准确性，建议调整稀释比例。

      • 问

        In vivo周期长的话，不太好做预实验，怎么办？

      • 答

        In vivo造模取样后，可将样品分装，取一部分样品做ELISA预实验，剩余样品再进行正式实验；如多批次实验，操作较为一致，后续可取消预实验，根据前期结果进行ELISA实验浓度设置。

      • 问

        做实验前怎么知道待测血清中炎症因子的范围呢？多大是高多小是低？

      • 答

        需要根据文献推测，一般在健康人样本中，炎症因子表达很低，接近ELISA检测下限，样品无需稀释或1:1稀释即可，如已知为炎症疾病或造模样本，可参考文献，在预实验中设置1:10-100（或更高）的稀释比例，预实验检测后确定最佳浓度进行正式实验。

      • 问 ELISA实验中的洗板步骤如果没有洗板机，需要如何操作？
      • 答

        实验室ELISA实验做的较多，还是建议使用洗板机洗板，效果更好，也更方便控制。如果没有洗板机，在洗板过程中，需要注意洗板液添加后不要从孔中溢出，在加洗板液后，静置1-2min，甩干液体后，在吸水纸上大力拍干；重复三次。

      • 问

        ELISA实验中，酶标抗体识别的是哪个抗体？

      • 答

        在双抗夹心法ELISA中，酶标抗体识别的是检测抗体，对检测抗体进行识别和酶标记。

      • 问

        捕获抗体如何包被在96孔板上？

      • 答 如果选用的是即用型ELISA试剂盒，无需进行抗体包被；如果是非即用型的ELISA试剂盒，首先，要选择ELISA级别的板子，材质应为聚苯乙烯；然后用抗体包被液稀释（pH9.6的碳酸盐缓冲液或pH7.2的PBS或pH7-8的Tris-HCl）成工作浓度，然后每孔加100 μl稀释后的捕获抗体，室温或4℃过夜包被，然后进行洗板和封闭之后即可使用，如需长期保存，需要真空冻干后保存。
      • 问

        ELISA实验中的捕获抗体和检测抗体是同一个抗体么？

      • 答

        不是的，在双抗夹心法ELISA实验中，会同时用到捕获抗体和检测抗体，这两个抗体是针对同一抗原蛋白的不同抗原位点的两种抗体，这样才可以同时结合抗原分子。

      • 问 ELISA可以测DNA的表观么？
      • 答 不可以，ELISA是利用免疫学原理，定量检测蛋白质表达的技术。测DNA表观遗传学，主要是检测DNA甲基化，可以选用ChIP技术。
      • 问 高背景的原因有哪些？如何改进？
      • 答 1、手动洗涤时请勿将洗涤液溢出孔外/检查洗板机是否正常工作，调节洗板机“洗涤量”、“洗涤循环”和“抽吸”等参数； 2、封闭的时间和温度是否适当，更换封闭buffer 3、检查底物在使用前是否曝光了，孵育底物过程微孔板是否曝光 4、检查是否按说明书稀释底物 5、加终止液三分钟后即读数
      • 问 重复性差的原因有哪些？如何改进？
      • 答 1.可能样本中有沉淀物、杂质，可以使用前先离心 2. 可能微孔板中有气泡，可以 小心用针尖挑破，注意不要划伤微孔板底部 3.可能微孔包被面被吸头划破，加液时小心操作 4.边际效应，实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡，勿将微孔板置于温度变化太大的地方（如通风处、阳光直射处等），铝箔纸包住微孔板底部及下部外沿降低边际效 5.蒸发，各步之间，须使用封版胶密封反应板
      • 问

        标曲做不出来的原因有哪些？如何改进？

      • 答

        1.可能样本中有沉淀物、杂质，可以使用前先离心

        2. 可能微孔板中有气泡，可以 小心用针尖挑破，注意不要划伤微孔板底部

        3.可能微孔包被面被吸头划破，加液时小心操作

        4.边际效应，实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡，勿将微孔板置于温度变化太大的地方（如通风处、阳光直射处等），铝箔纸包住微孔板底部及下部外沿降低边际效

        5.蒸发，各步之间，须使用封版胶密封反应板" "

        1. 标准品是否按说明书推荐重溶，稀释；注意保存方法及期限

        2.酶和底物不显色，进行颜色测试以判断酶及显色液是否正常工作

        3.显色时间不足/孵育温度低，延长显色时间/选择最适反应温度，确保实验室温度稳定；采用恒温孵育箱注意不要叠放微孔板

      • 问

        没有信号的原因有哪些？如何改进？

      • 答

        1.试剂盒不匹配：说明书中的标明的样本种属及具体类型；检测范围和灵敏度；有的试剂盒会标明回收率及线性值

        2.样本稀释度不足或过大：参考文献中对于浓度范围的描述，按说明书以及既有数据分析来稀释样本；若不清楚表达量如何，应对样本进行梯度稀释，选择最佳稀释浓度

        3.样本表达量低：通过其他实验验证样本是否表达；样本中掺入标准品做对照孔，如果OD值明显升高则样本中待检物较少

      • LncRNA LINK-A Remodels Tissue Inflammatory Microenvironments to Promote Obesity

        Yu Chen, Hui Chen, Ying Wang, Fangzhou Liu, Xiao Fan, Chengyu Shi, Xinwan Su, Manman Tan, Yebin Yang, Bangxing Lin, Kai Lei, Lei Qu, Jiecheng Yang, Zhipeng Zhu, Zengzhuang Yuan, Shanshan Xie, Qinming Sun, Dante Neculai, Wei Liu, Qingfeng Yan, Xiang Wang, Jianzhong Shao, Jian Liu, Aifu Lin

        Advanced Science. 2023 Dec 25 .

        影响因子： 15.1

      Certificate of Analysis(COA)

      • Human IL-1β ELISA Kit产品说明书
      • 0