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  • 苏木素-伊红(HE)染色试剂盒
  • 货号: abs9217
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    abs9217-100ml 现货 ¥368.00
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    产品描述
    描述

    苏木素染液综合了多种经典的方法配制而成。该溶液无汞,可用于免疫组化复染和 H&E 染色。

    组分:

    A:苏木素染液      100ml

    B:伊红染液          100ml

     

    使用方法
    实验流程:
    冰冻切片后,各种步骤(干燥,乙醇或甲醇固定,热固定,使用带电的或有粘性的盖片)保 证组织切片在染色过程中不脱落。
    1.95%乙醇:在 HE 染色开始前,组织切片需要固定并水化。将切片置于 95%乙醇中约 2min, 开始水化并固定组织。 注意:跳过使用 95%乙醇对组织进行水化和固定,并不影响形态学上的细节。合理的解释 为第二步将为水化提供足够的水。
    2.水化:进一步对组织切片进行水化 3~5min,并冲掉前一步残留的乙醇。 注意:与第一步相似,跳过水化对于组织染色的质量非常小。
    3.苏木素:水化后,组织切片用苏木素染色 1~3min,可根据染色结果和要求调整染色时间。 苏木素是一种基本染料,可以对细胞的酸性成分进行染色,包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白, 将他们染成蓝-紫色。 注意:没有苏木素,伊红会将组织染成亮粉红色;显而易见的是缺乏细胞核。组织结构很难 区分,细胞内成分几乎都不存在,难以辨别。
    4.水洗:苏木素染色后,用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗,可将多余的 染料,媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽,金属光泽可阻止苏木素的染色。 注意:跳过此步,将产生不好的结果,例如沉淀的形成,染液的稀释,表面金属光泽的存在。
    5.酸酒精:酸酒精分色剂 3~5sec。在苏木素染色方法中,组织切片有意过度染色,酸酒精 将去除多余的染料以及玻片上的背景染色。
    注意:如果没有此步骤,组织切片将变为暗紫色。嗜酸结构,例如,胶原,将不会呈现明亮 的粉红色。组织结构之间将很难区分。很难对切片做出正确的判断。
    分色过度可能是由于:
    1)酸浓度过高;
    2)脱色时间过长等。
    分色不足是由于:
    1)酸浓度过低;
    2)脱色时间不足;
    3)在切片上有多余的蛋白或者明胶等。
    6.水洗:水洗 30sec,终止酸酒精反应,进一步阻止酸酒精从组织切片上将大量苏木素去除。 注意:如果切片没有经过漂洗,酸酒精可以过度脱色。如果不去除脱色剂,酸酒精将持续从 组织切片上去除苏木素。
    7.自来水冲洗或用蓝化液蓝化:自来水冲洗 3~5min,可起到发蓝处理,将紫红色的苏木素 转变为蓝紫色。通常,发蓝试剂是 pH 依赖性的,由碱性溶液构成。因此,如果自来水作为 发蓝试剂,pH 值的每天监控是非常重要的,因为自来水的 pH 值可能每天都会波动。 或用蓝化液蓝化,30sec~1min;流动的自来水冲洗 5min;
    注意:跳过发蓝试剂步骤,将会导致苏木素染液的颜色发生微妙的变化,难以区分。代替深 蓝色,细胞核将呈现紫色,有时甚至是红色。细胞核不可过度蓝染。如果组织染色过蓝,一 般是在组织切片上苏木素过多所致。
    8.水洗:为伊红复染做准备,通过水洗 30sec,将多余的发蓝试剂去除。因为在碱性环境下, 伊红无法染色,水洗去除发蓝试剂将允许伊红保持其酸性 pH 值,使伊红得以均匀复染。 注意:发蓝试剂之后,如果没有水洗,组织切片无法正确使用伊红染色。因此,酸性结构将 被染为苍白色并且不均匀,进而导致错误的判断。
    9.伊红:为了正确区分胞内结构,伊红是出色的苏木素复染剂。伊红复染 30~60sec,可根 据染色结果和要求调整染色时间。伊红是酸性染料,可染细胞质,尤其是线粒体、分泌颗粒 和胶原。它可以区分细胞内不同的细胞器以及不同的结缔组织。
    注意:使用伊红复染组织切片的失败,将导致组织切片的低分化。
    染色较弱是由于:
    1)组织切片过薄;
    2)染色时间不足;
    3)随后 95%酒精分化过度。
    染色过度是由于:
    1)染液浓度较高(可能是由于过度蒸发);
    2)组织切片过厚;
    3)染色时 间过长;
    4)随后 95%酒精分化不足。
    伊红染色未分化(一种颜色)是由于:
    1)固定不彻底; 2)过度染色,a)染色时间过长;b)染液浓度过高。
    10.95%乙醇:95%乙醇处理 2 s~1 min,根据染色结果和要求调整;伊红分化将产生不同的 粉色。 注意:如果 95%乙醇被稀释(例如,从前一步染色中携带了伊红),分化的效果较差。
    11.100%乙醇:通过 100%乙醇使组织切片脱色。100%乙醇处理 1 min;再用新的 100%乙醇 处理 1 min。
    注意:这一步很难引起注意,若无 95%乙醇,难以区分酸性结构,组织切片成为粉色。若 无 100%乙醇脱水,组织切片不能完全脱水,导致在盖片下形成水珠。这些水珠可与下一步 的二甲苯结合而形成白色混浊物,这将影响组织切片的质量。
    12.二甲苯:二甲苯处理 5min。在充分脱水后,二甲苯可将组织切片上的酒精去除。去除酒 精后,在载玻片上加盖玻片时,二甲苯也可作为包埋剂确保可溶解。由于有潜在的毒性,二 甲苯替代品,例如柠檬烯、环烷烃也可使用。替代品可提供相同的组织染色质量,并且他们 使用更安全,操作更简单。
    注意:当跳过此步骤时,不使用二甲苯透明,酒精将会保存于组织切片上,导致伊红从切片 上流出。
    13. 封片:中性树胶封片,自然风干或烤干,显微镜观察。
    储存/保存方法
    避光储存于室温,有效期12个月。
    注意事项
    HE 染色是一个对经验要求非常高的染色,实验流程中所提供的染色时间都是参考时间,要根据实验原理,结合具体情况而定。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
        提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
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