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  • 五色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔通用二抗）

    金牌
    • 多色试剂盒
    货号： abs50013
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs50013-20T 现货 ￥5890.00
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    abs50013-100T 现货 ￥22410.00
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    产品介绍 商品评论 FAQ 引用文献(18) 相关视频 商品相册 相关文档 相关产品
    概述
    别名
    多色试剂盒
    描述
    组织微环境中有复杂的细胞组成，这些细胞的表型、状态、丰度、分布都有着重要的生物学意义和临床价值。借助抗体染色可以将其在组织原位上呈现出来。免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术，常规IHC检测只能展示单一指标，难以呈现复杂的组织微环境中的细胞组成、状态和关系，而这些信息对疾病的诊断和治疗至关重要！
    酪氨信号放大技术原理：类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采用HRP标记的二抗，HRP催化加入体系的荧光素底物，生产活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，使样品上稳定的共价结合荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的抗体，在换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
    检验原理
    多重荧光免疫组化染色是基于抗原、抗体特异性结合的原理，选用辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗抗体，对试剂盒中的荧光染料进行活化，将信号共价结合到抗原上。借助于不同的荧光染料标记，通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。
    产品组成
    TSA单色荧光染料520、TSA单色荧光染料570、TSA单色荧光染料620、TSA单色荧光染料700、信号放大反应液、鼠兔通用型HRP标记二抗、抗荧光淬灭封片剂、DAPI.
    应用
    主要用于组织、石蜡切片、TMA芯片的免疫组化染色。
    使用方法
    1.荧光染料的稀释：若染料为干粉，使用100ulDMSO溶解，制成100X染料母液；若染料为液态表示出厂即为DMSO溶解的100X母液；使用信号放大反应液按1:100稀释制备染料工作液（现用现配）；DAPI使用无菌水按1:100稀释制备工作液。 2.二抗的使用：该试剂盒搭配为鼠兔通用型二抗，不适用小鼠组织，实验前请核实一抗种属是否匹配。小鼠组织样本请参考（#abs50029）。
    性能
    储存/保存方法
    荧光染料需避光保存，2～8℃储存，收到货起有效期为12个月。
    注意事项
    1. 本试剂盒只用于免疫组化，不做其他用途。 2. 本试剂盒仅限于专业人员使用。 3. 应采用适当的防护措施，以避免试剂同皮肤和眼睛接触。 4. 超过有效期的试剂活性可能降低，因此不得使用超过有效期的试剂。 5. 若将本试剂盒的染色组分与其他公司的产品混合使用，在染色过程中可能出现异常情况。 6. 脱蜡不彻底，容易影响染色效果。 7. 为了防止可能出现的假阴性、假阳性结果，实验过程中需有阳性对照及阴性对照同时进行。 8. 使用本试剂盒中所产生的各种废弃物都应按照《医疗废物管理条例》进行处理。
    参考文献
    参考文献
    1. Mingzhu Yang, et al., Chemical-induced chromatin remodeling reprograms mouse ESCs to totipotent-like stem cells. Cell Stem Cell. 2022 Mar 3
    2. Xin Guan, et al., Nanoparticle-enhanced radiotherapy synergizes with PD-L1 blockade to limit post-surgical cancer recurrence and metastasis. Nature Communication. 2022 May 20
    3. Qian-Yue Zhang, et al., Lymphocyte infiltration and thyrocyte destruction are driven by stromal and immune cell components in Hashimoto’s thyroiditis. Nature Communications. 2022 Feb 9
    4. Dabbs David J. 诊断免疫组织化学(M). 北京：北京大学医学出版社，2008.9.
    5. 美】Ed Harlow, David Lane. 抗体技术指南(M). 北京：科学出版社，2002:79-80,105.
    6. Stack, E. C., et al., Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods, 2014 70 (1): 46-58.
    7. 钱帮国. 焦磊. 多标记免疫荧光染色及多普成像技术在组织学研究中的应用. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2017 (4): 373-382.
    温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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      • 问 做好的多色片子，无法进行及时扫描，该如何保存？
      • 答 需要避光防震，在4℃条件下保存
      • 问 有详细的实验操作流程吗？
      • 答 有的，我们有完整的操作视频，您可以点击链接观看完整视频。
      • 问 样本可以做成冰冻切片吗？
      • 答 可以的。抗原修复步骤不推荐用加热的方法，推荐用抗体洗脱液（abs994)
      • 问 所有操作要避光吗？
      • 答 不需要，在常规环境下操作就可以，染料的荧光强度很高。
      • 问 抗体修复液每一轮修复都要更换吗？
      • 答 是的，每一轮都要根据抗体选择相应的修复液。
      • 问 染料的选择会影响后染色吗，有共定位的话怎么办？
      • 答 共定位的情况，我们可以通过单一通道观察来更好的检测各指标的分布情况，染料不会对染色有影响，串色的情况需要预实验做充足，包括抗体稀释比例，染料与放大液比例，修复条件的确定。
      • 问 多色用的一二抗各是什么种属？
      • 答 多色的优势在于一二抗种属无需特别要求，一抗根据样本种属选择既可，二抗根据一抗选择即可，多个抗体组合，种属不会有影响。
      • 问 抗体洗脱和微波修复哪种方式洗脱效果更好？
      • 答 微波修复洗脱更稳定，抗体洗脱液对大多数抗体都管用，难洗的抗体延长洗脱时间就可以啦！
      • 问 实验用时真的一天能做完吗？
      • 答 相比普通的组织荧光实验，我们一抗的孵育时间只需室温30min，二抗和信号放大步骤只需孵育10min，能大大节约时间，五色左右可在一天内做完。
      • 问 多色样本的寄送有条件限制吗？
      • 答 正常的石蜡切片和组织芯片很稳定，只要防震盒常温运输即可，冰冻切片的话，需要干冰低温运输。
      • 问 我的组织还有GFP蛋白，给结果的时候能排除干扰吗？
      • 答

        可以的，结果分析的时候可以避免绿色通道，分析软件赋予的颜色是伪彩色，可以更换其他颜色。

      • 问 我这边提供抗体的话，抗体需要满足什么条件吗？
      • 答

        抗体需要要满足IHC的实验应用，各品牌供应商都会提供相应的实验验证的，爱必信组化抗体经过严格实验验证，是不错的选择。

      • 问 如果我能提供抗体给你们做服务的话，需要的抗体量是多少？
      • 答

        需要的抗体量要根据样本数来，但一般来讲，50-100ul的抗体足够完成预实验+正式实验了。

      • 问 在指标与染料的搭配以及染色顺序上，有什么规律吗？
      • 答 并没有一个特别的线性关系，和蛋白的种类、表达量以及修复条件都有关系，所以会多因素考虑，多尝试，预实验很重要。
      • 问 TSA技术原理中有抗体洗脱的步骤，但是在你们的试剂盒步骤说明中却没有？
      • 答

        试剂盒步骤中的抗原修复过程就是抗体洗脱过程。

      • 问 B细胞、T细胞、DC细胞常用maker能推荐下吗？
      • 答

        T细胞：CD3、CD4、CD8、FoxP3（再细化还有：GranzymeB、PD-1、TIM-3、CD45）
        B细胞：CD19 ；
        DC细胞：CD8α、CD11b

      • 问 荧光染料激发光和发射光波长分别是多少？
      • 答

        染料名称

        保存温度

        波长

        相似荧光染料

        激发波长

        发射波长

        DAPI

        -20℃

        360

        461

        DAPI

        TSA单色荧光染料480

        430

        480

        Opal480

        TSA单色荧光染料520

        490

        520

        FITC/AF488/Opal520

        TSA单色荧光染料540

        520

        540

        AF514/Opal540

        TSA单色荧光染料570

        550

        570

        CY3/AF555/Opal570

        TSA单色荧光染料620

        590

        620

        AF594/Opal620

        TSA单色荧光染料650

        640

        660

        AF610/Opal650

        TSA单色荧光染料700

        682

        702

        AF680/CY5.5/Opal690

        TSA单色荧光染料770

        740

        780

        Opal780

      Certificate of Analysis(COA)

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