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  • 2×Fast qPCR Mix (Probe )

    货号: abs60039
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60039-1ml×2 1-2周 ¥630.00
    - +
    abs60039-1ml×5 1-2周 ¥1523.00
    - +
    大包装询价
    产品描述
    描述
    2×Fast qPCR Mix (Probe )结合了最新的缓冲体系技术和抗体修饰的热启动Taq酶,确保快速、高特异性和高灵敏度的实时荧光PCR检测,适用于所有实时荧光定量PCR仪。本试剂适用于探针(TaqMan®, Scorpions® and molecular beacon)检测。2×Fast qPCR Mix (Probe )包含所有实时荧光定量PCR的必要组分,包括dNTPs、稳定剂和增强剂,非常方便使用。操作时,实验人员只需添加引物,模板和探针。

     

    使用方法

    PCR 反应液配制(以 20μl 为例):

    2×Fast qPCR Mix (Probe )10μl
    10μM Forward Primer0.8μl
    10μM Reverse Primer0.8μl
    10μM Probe0.2μl
    模板as required
    ddH2Oup to 20μl
    储存/保存方法
    -20℃保存,有效期12个月。
    技术指标
    灵敏度 and Ct 值:

    当用我们公司的产品和其它同类产品比较时,我们强烈推荐梯度稀释扩增试验,直到不能检出的模板浓度,这是检测灵敏度的唯一方法。早期的 Ct 值不能代表好的灵敏度,只能说明扩增速度快。


    PCR 扩增条件:
    以下的程序适合长度200bp 以内产物的扩增,当然也可以根据不同情况适当调整。
    StepTempTimeCycles
    Polymerase activation95°C*2-5min1
    Denaturation95°C10s40
    Annealing/ Extension60-65°C**20-50s

    *2min for cDNA, 5min for genomic DNA
    **两个探针以上的多重荧光检测需要达到50s
    反应结束后,根据仪器情况可选择熔解曲线分析。

    PCR优化提示:
    引物和探针: 以下的建议是基于TaqMan探针的实时荧光PCR检测,其它类型探针请参考相关资料。任何实时荧光PCR检测的特异
    性和扩增效率都与特定序列、引物探针浓度、和扩增子长度有关。我们强烈推荐考虑以下几点:
    • 使用引物设计软件,比如Primer3 (http://frodo.wi.mit.edu/primer3/) 或者visual OMPTM (http://dnasoftware.com/)。引物的Tm值一般
    在60°C左右;
    • 最佳的扩增子长度在80-200bp,最好不要超过300bp;
    • 最终引物浓度400nM 适合大部分实时荧光PCR检测, 如需测试最佳引物浓度,我们建议梯度范围是0.2-1μM。同时引物浓度要
    相同。
    • 最终探针浓度100nM 适合大部分实时荧光PCR检测,我们建议探针的浓度跟引物浓度相比,至少低两倍。
    注意:在多重实时荧光PCR检测中,探针浓度超过100nM 会导致荧光信号交叉污染。
    模板:首先要确保模板的纯度和浓度,其次模板不能含有PCR抑制剂(如EDTA)。模板的用量取决于DNA的类型(genomic DNA和cDNA),以下几点需要考虑:
    • Genomic DNA: 在单个PCR反应中,不要超过1μg
    • cDNA: 在单个PCR反应中,我们建议使用100ng ,具体使用量根据情况调整
    MgCl2: 2×Fast qPCR Mix (Probe ) 包含最优的浓度,无需再进一步优化
    PCR 质控: 在实验过程中对可能存在的污染DNA的质控非常关键,它可能会影响你的实验数据真实性。在实验过程中一般需要包
    含一个阴性质控(即不加模板)。当操作两步法RT-PCR 的时候,设置一个非RT的质控对照。
    ROX: 2×Fast qPCR Mix (Probe ) 不包含ROX (5-carboxy-X-rhodamine, succinymidyl ester)。

    适用仪器
    2×Fast qPCR Mix (Probe )适用于所有的实时荧光定量PCR 仪。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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