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  • 2×Fast Pfu Master Mix

    货号: abs60062
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs60062-1ml 1-2周 ¥315.00
    - +
    abs60062-1ml×5 1-2周 ¥1470.00
    - +
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    产品描述
    描述

    本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂,预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化,高保真,错误率仅为1.3x10-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便。较普通Pfu酶,2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间,非常适用于1-20kb长片段的扩增。

    产品特点:

    高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的50倍。

    灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段(图例一)。

    快速高效:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上,可在较短时间内获得高产量的PCR产物。

    快捷:PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。

    实验方法:

    常用反应体系(50μl):

    2×Fast Pfu Master Mix*

    25ul

    上游引物

    0.2-1.0uM(终浓度)

    下游引物

    0.2-1.0uM(终浓度)

    模板

    1-50ng(质粒)

    10ng-1ug(基因组)

    ddH2O

    至50ul


    *Mg 2+终浓度为2mM

    常用PCR循环:

    当扩增片段<3K;

    94℃

    1 分钟 30 秒

    30 次循环

    94℃,20 秒

    50~60℃,20 秒

    72℃,1kb/30 秒

    72℃

    5 分钟

    4℃

    保温

    当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp);

    94℃

    5 分钟

    30 次循环

    94℃,5 秒

    68℃,1kb/30 秒

    72℃

    5 分钟

    4℃

    保温

    使用建议:

    Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3´端"A"突出,除使用PCR一步定向克隆试剂盒外,其它PCR产物的克隆方案有:

    (1)PCR前引物进行5´端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。

    (2)将产物3´末端加A后再与T载体连接。

    (3)由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3´端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3’→5´外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系。

    储存/保存方法
    -20℃ 有效期12个月
    技术指标

    质量保证:经检测无外源核酸酶残留;qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留;能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

    产品用途
    用于要求保真度比较高,扩增长度较长的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。
    注意事项
    (1)需溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀。
    (2)对高 GC 含量模板,建议将变性温度提高到98℃。
    (3)对于高 GC 模板,建议配套使用 PCR 万能增强剂 I或者添加终浓度为 5%-8% DMSO。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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