双链RNA（dsRNA）ELISA检测试剂盒（J2）
- Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based),Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based)
| 货号-规格 | 货期 | 价格 | 数量 |
| abs590003-96T | 缺货 | ￥5500.00 |
大包装询价| 概述 | |
| 别名 | Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based) |
| 检验原理 | 夹心ELISA |
| 形式 | 试剂盒 |
| 产品组成 | J2单抗包被Microplate，K2检测抗体，dsRNA标准品，HRP酶标二抗，TMB显色液，终止液，封板膜等。 |
| 使用方法 | 详见随货说明书。 |
| 背景说明 | 基于使用两种双链 RNA (dsRNA) 特异性单克隆抗体，dsRNA 检测试剂盒可以灵敏和选择性地检测 dsRNA 分子（大于 30-40 bp），而不受其核苷酸组成和序列的影响。检测具有高度特异性：在存在 1.000-10.000 倍过量其他核酸的情况下，可以检测核酸提取物中的 dsRNA。该测定基于夹心 ELISA 原理，并使用 J2 (IgG2a) 小鼠单克隆抗体对 dsRNA 作为捕获抗体。单克隆抗体 K2 (IgM) 用作检测抗体。J2抗dsRNA IgG2a单克隆抗体已成为dsRNA检测的金标准。它最初用于植物病毒的研究，但自从 Weber 等人的开创性论文以来。2006 年，J2 被用来证明所有测试的正链 RNA 病毒在受感染的细胞中产生大量的 dsRNA，这种抗体已广泛用于各种系统，如 200 多篇科学出版物所述。J2 可用于检测多种病毒的 dsRNA 中间体，如丙型肝炎病毒、登革热病毒、鼻病毒、基孔肯雅病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、猪瘟病毒、Brome 花叶病毒以及更多存在于培养细胞和固定石蜡包埋的组织学样品中。 |
| 性能 | |
| 储存/保存方法 | 整个试剂盒储存在 -20ºC 下。试剂盒解冻后，可将其在 4ºC 下保存 5 天。对于长期储存，建议在 –20ºC 下分装并冷冻抗体和 dsRNA 成分。 |
| 产品用途 | 本试剂盒可检测核酸提取物中的病毒 dsRNA 或非病毒来源的大型天然或合成 dsRNA，以及检测人工合成 (m)RNA 制剂中是否存在不需要的 dsRNA 分子。 |
| 注意事项 | 本产品仅供研究和体外测试使用，不适用于涉及人类或动物的诊断或治疗程序。 |
| 温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究 |
- 实验方法 实验条件
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- 如果我的样本是组织，有推荐处理组织样本的protocol吗？
- 我们的ELISA试剂盒做组织样本，具体裂解方式参考如下：
1、裂解液配置：建议选择：组织/细胞裂解液 (多因子检测)（abs9225）裂解液，在使用前按100:1的比例加入广谱型
蛋白酶抑制剂混合物（不含EDTA，100×DMSO储液）（abs9161），配置成工作液，现配现用；
2、称量组织，按每10mg加入100ul裂解液工作液进行裂解针对组织，利用组织处理器或者其他组织处理装置，处理
样本，保证样本处理完全；
3、将裂解收的样品10000-14000rpm，4℃离心10min，取上清（建议组织裂解液离心两次）；
4、取上清做BCA总蛋白浓度测定，完成后续操作。BCA法测量蛋白浓度请参考BCA 蛋白定量试剂盒（abs9232）说明
书；
5、根据测定的蛋白浓度，将样本稀释成总蛋白浓度为1μg/μl左右即可进行ELISA实验（部分指标需根据预实验结果再
行调整）。
- ELISA数据处理有专门的软件吗？
- 有，可以到如下链接下载免费版软件，点击下载。
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同一样品多次活性测试结果差异大怎么解决？
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样本保存不当，会导致多次实验结果偏差较大，样本应尽量减少反复冻融，如需多次检测，需在取样后分装保存。
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检测样本是细胞培养上清，那么细胞数目对炎症因子的浓度有影响吗？
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有影响，所以不同样本可以比较的前提条件是培养细胞数水平接近一致。
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请问标曲是每次都要做吗？
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是的，每次实验，孵育时间，洗板次数等等条件均不一样，不同实验的标曲不能混用，做一次实验需要做一次标准曲线，并且用当次，同一块板上的标准曲线结果去计算板内样品的浓度，才能得到准确的结果。
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做预实验时每种要做几个复孔呀？
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预实验视情况而定，如果整个板子孔数较为充足，建议两个复孔，如不充足，单孔也可以。要尽量保证实验过程中加样准确。
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血清样本少量溶血，颜色稍深，对结果有影响吗？
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会有影响，建议取样时需注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。
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试剂盒有推荐稀释浓度还需要自己测吗？
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试剂盒一般会给出不同样品的推荐稀释比例，但是为大致范围，最好还是根据自己的样本情况，设计预实验测量计算。
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加完终止液之后测的几次数据差别也蛮大？
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加完终止液后，显色反应也不是永远停止，形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深，建议在15 min内读数。
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副孔差别比较大，是没洗干净吗？
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复孔值差异较大，主要原因应考虑加样是否准确，洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。
- 配好的抗体没用完如何保存，可保存多久？预实验用了一个试剂盒里面的部分板子和试剂，剩下的板子和试剂还能继续用于正式实验吗？
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一般来讲，配好的母液，可以在四度保存，最多一个月左右。剩下的板子和试剂是可以继续用于正式实验的，间隔时间不要太长，一个月之内均可，需注意试剂避免污染，板子保持干燥。
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最后显示的OD值在多少之间属于可用值，有要求吗？
- 有的，为保证标曲的线性范围，建议最好标曲最高点OD值在0.8-3之间，同时，线性（四参数拟合）较好，副孔值CV值较低（15%以下）时，结果可用。
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样本总是在标准曲线之外，稀释100倍也是，怎么办？
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在设置稀释倍数之前，需要参考相关文献，对于一些表达极高的蛋白，确实会出现这种情况，建议继续提高稀释比例。
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试剂盒推荐用450和540nm双波长检测，但条件有限可否换成450和620的双波长？如何使用校准波长？还有，用空白孔校准可以么？
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可以的，TMB底物显色后，吸光峰值在450nm，另外的校准波长是防止气泡等杂质造成的干扰设置，避开450左右50nm以上即可。两次读取的OD值，用OD450 - OD校准波长即可。尽量还是建议有条件的选用双波长校准的方法，因为避免了不同孔的读数影响，防止出现空白孔污染，导致读数较高，无法校准的情况。
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ELISA可以检测胞内蛋白么？
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可以的，选用支持组织匀浆的ELISA试剂盒即可，将组织样品或细胞样品进行裂解，提取胞内蛋白后进行蛋白定量，保证每孔上样总蛋白量一致即可。
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爱必信的ELISA试剂盒显色液是双组份的，有些其他品牌的是单组分的，使用单组分的有影响么？
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HRP酶标二抗的ELISA试剂盒，显色底物一般为TMB，TMB不稳定，曝光或污染氧化后会出现显色反应，导致实验背景升高，或无法使用，所以爱必信的ELISA试剂盒将显色液调整为双组份，方便稳定保存，仅在使用前混合，避免了TMB的不稳定影响实验结果。如您选用的试剂盒为单组分显色液，在使用前检测是否为无色透明，如果是正常的，对结果也没有影响，可以放心使用。
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整个过程需要避光吗？避光需要避到什么程度呢？
- ELISA实验中，在酶标抗体孵育，以及显色底物孵育这两步建议避光，其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹，或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。
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标准曲线在推荐的浓度下，r值为0.9，做了多次都是这样，怎么办？
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要仔细核对产品说明书，看是否用了推荐的拟合方法，如爱必信的ELISA试剂盒，需要使用四参数拟合方式进行拟合，用错拟合方式，会导致r方值较低；如拟合方式无误，需检查是否有个别标曲孔数值异常，排查实验中是否出现污染或倍比稀释时出现失误。
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封板膜什么时候用？每次加液后都要换吗？
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封板膜在孵育样品、检测抗体以及HRP酶标抗体是，都要盖好封板膜，减少挥发及污染几率。每次使用后要更换新的封板膜。
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手动洗板过程中，拍过抗体或抗原的滤纸需要扔吗？
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是需要更换的，防止造成交叉污染，影响实验结果的准确性。
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有的wash buffer析出结晶后在37℃也不溶解，怎么办？
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可提高至55度，并多次摇晃。溶解后按比例稀释即可使用。
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测得的值都低于标准曲线的最低值，是什么原因，应该怎么解决？
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基质效应导致，由于样本的基质环境相对于试剂盒中的稀释液更为复杂，可能存在部分成分抑制HRP酶活性，在样本中待测蛋白表达极低，甚至不表达的时候，OD值低于稀释液的值是存在的，按照0计算即可。首先是检查样品是否稀释倍数过高，降低稀释比，直至直接加样本原液，如还检测不出，需排查原因，建议在实验组别设置中添加阳性对照孔，用明确表达的样品作为阳性对照，如果标准曲线及阳性样品均可测得正常的表达浓度，则表明实验成功，其余待测样品表达含量低于检测下限，按照0计算即可。这种情况尤其对于炎症因子较为常见，在健康样本中，表达含量极低。
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因为检测限的原因，同一块ELISA板子，部分样本稀释，部分样本1:10稀释，部分1:20稀释，这样设置可行吗？结果可以比较吗？
- 可以比较，不同稀释比例，是因为不同样本间的表达差异较大，只要保证稀释后的检测样品测量值准确，还原回稀释倍数后的浓度是可信的。可以用来比较不同样本的原始浓度差。
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试剂盒里面有捕获抗体么？
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即用型ELISA试剂盒中，捕获抗体已经预包被至试剂盒中的ELISA板上，没有单独的捕获抗体提供，直接使用ELISA板孵育稀释后的样本及标准品即可。
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ELISA实验中，检测计算抗原的浓度，临界值怎么确定？
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根据曲线测定的浓度，建议落在标准曲线的中间位置较好，极限最好不要超过标准曲线的上下限，如果超出较多，会影响计算结果准确性，建议调整稀释比例。
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In vivo周期长的话，不太好做预实验，怎么办？
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In vivo造模取样后，可将样品分装，取一部分样品做ELISA预实验，剩余样品再进行正式实验；如多批次实验，操作较为一致，后续可取消预实验，根据前期结果进行ELISA实验浓度设置。
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做实验前怎么知道待测血清中炎症因子的范围呢？多大是高多小是低？
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需要根据文献推测，一般在健康人样本中，炎症因子表达很低，接近ELISA检测下限，样品无需稀释或1:1稀释即可，如已知为炎症疾病或造模样本，可参考文献，在预实验中设置1:10-100（或更高）的稀释比例，预实验检测后确定最佳浓度进行正式实验。
- ELISA实验中的洗板步骤如果没有洗板机，需要如何操作？
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实验室ELISA实验做的较多，还是建议使用洗板机洗板，效果更好，也更方便控制。如果没有洗板机，在洗板过程中，需要注意洗板液添加后不要从孔中溢出，在加洗板液后，静置1-2min，甩干液体后，在吸水纸上大力拍干；重复三次。
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ELISA实验中，酶标抗体识别的是哪个抗体？
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在双抗夹心法ELISA中，酶标抗体识别的是检测抗体，对检测抗体进行识别和酶标记。
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捕获抗体如何包被在96孔板上？
- 如果选用的是即用型ELISA试剂盒，无需进行抗体包被；如果是非即用型的ELISA试剂盒，首先，要选择ELISA级别的板子，材质应为聚苯乙烯；然后用抗体包被液稀释（pH9.6的碳酸盐缓冲液或pH7.2的PBS或pH7-8的Tris-HCl）成工作浓度，然后每孔加100 μl稀释后的捕获抗体，室温或4℃过夜包被，然后进行洗板和封闭之后即可使用，如需长期保存，需要真空冻干后保存。
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ELISA实验中的捕获抗体和检测抗体是同一个抗体么？
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不是的，在双抗夹心法ELISA实验中，会同时用到捕获抗体和检测抗体，这两个抗体是针对同一抗原蛋白的不同抗原位点的两种抗体，这样才可以同时结合抗原分子。
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ELISA可以测DNA的表观么？
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不可以，ELISA是利用免疫学原理，定量检测蛋白质表达的技术。测DNA表观遗传学，主要是检测DNA甲基化，可以选用ChIP技术。
- 高背景的原因有哪些？如何改进？
- 1、手动洗涤时请勿将洗涤液溢出孔外/检查洗板机是否正常工作，调节洗板机“洗涤量”、“洗涤循环”和“抽吸”等参数； 2、封闭的时间和温度是否适当，更换封闭buffer 3、检查底物在使用前是否曝光了，孵育底物过程微孔板是否曝光 4、检查是否按说明书稀释底物 5、加终止液三分钟后即读数
- 重复性差的原因有哪些？如何改进？
- 1.可能样本中有沉淀物、杂质，可以使用前先离心 2. 可能微孔板中有气泡，可以 小心用针尖挑破，注意不要划伤微孔板底部 3.可能微孔包被面被吸头划破，加液时小心操作 4.边际效应，实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡，勿将微孔板置于温度变化太大的地方（如通风处、阳光直射处等），铝箔纸包住微孔板底部及下部外沿降低边际效 5.蒸发，各步之间，须使用封版胶密封反应板
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标曲做不出来的原因有哪些？如何改进？
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1.可能样本中有沉淀物、杂质，可以使用前先离心
2. 可能微孔板中有气泡，可以 小心用针尖挑破，注意不要划伤微孔板底部
3.可能微孔包被面被吸头划破，加液时小心操作
4.边际效应，实验之前将微孔板和试剂在室温下平衡，勿将微孔板置于温度变化太大的地方（如通风处、阳光直射处等），铝箔纸包住微孔板底部及下部外沿降低边际效
5.蒸发，各步之间，须使用封版胶密封反应板" "
1. 标准品是否按说明书推荐重溶，稀释；注意保存方法及期限
2.酶和底物不显色，进行颜色测试以判断酶及显色液是否正常工作
3.显色时间不足/孵育温度低，延长显色时间/选择最适反应温度，确保实验室温度稳定；采用恒温孵育箱注意不要叠放微孔板
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没有信号的原因有哪些？如何改进？
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1.试剂盒不匹配：说明书中的标明的样本种属及具体类型；检测范围和灵敏度；有的试剂盒会标明回收率及线性值
2.样本稀释度不足或过大：参考文献中对于浓度范围的描述，按说明书以及既有数据分析来稀释样本；若不清楚表达量如何，应对样本进行梯度稀释，选择最佳稀释浓度
3.样本表达量低：通过其他实验验证样本是否表达；样本中掺入标准品做对照孔，如果OD值明显升高则样本中待检物较少
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