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  • 双链DNA酶

    • dsDNase
    货号: abs60248
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    abs60248-50T 现货 ¥180.00
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    产品描述
    描述
            dsDNase 是一种核酸内切酶,能够裂解 DNA 中的磷酸二酯键,生成带有 5'- 磷酸和 3'- 羟基末端的寡核苷酸。dsDNase 能够特异性的消化双链 DNA(double-stranded DNA, dsDNA)而不会消化单链
    DNA、引物、探针和 RNA。dsDNase 具有热敏感性,可在 55℃条件下快速失活。dsDNase 主要用于反转录实验前快速去除 RNA 样本中的基因组 DNA 污染,与传统的使用 DNase I 去除基因组 DNA 污染
    的方法相比,无需额外加入 EDTA 失活,可减少对 RNA 的损伤,同时节省实验时间,保证 RNA 水平定量的准确性。
    产品组成 
    组分规格
    dsDNase(1 rxn/μl)50 μl
    10× dsDNase Buffer200 μl

    活性定义
    根据 Kunitz 实验方法,在 25℃ pH 5.0 的条件下,以过量的大分子 DNA 为底物,在 260 nm 波长处每分钟能引起吸光度增加 0.001 的酶量定义为 1 个活性单位(U)。
    储存缓冲液
    25 mM Tris-HCl (pH7.5,@25℃ ), 2.0 mM MgCl2, 10 mM NaCl,0.01 % (v/v) Triton X-100, 50 % (v/v) glycerol。
    抑制与失活
    抑制条件:金属离子、EDTA、SDS、DTT、β- 巯基乙醇、高盐离子浓度等会抑制 dsDNase 的活性;
    失活条件:55℃温育 5 min。
    质量控制
    蛋白质纯度
    通过 SDS-PAGE 并考马斯亮蓝染色,该酶纯度 ≥90%。
    RNA 酶活性检测
    将酶液与 RNA 底物 在 37 温育 1 h,通过凝胶电泳检测没有发现RNA 底物降解。
    功能检测
    该产品被用于测试去除来自 RNA 样本中的基因组 DNA 并进行了RT-qPCR 扩增,发现去除率 ≥99.9%。RNA 数量不受 dsDNase 处理的影响。
    使用方法
    使用方法
    1、于冰上配制如下反应体系: 
    试剂使用量
    dsDNase1 μl
    10× dsDNase Buffer1 μl
    模板 RNAX μl
    总 RNA1 pg~5 μg/10 μl
    mRNA0.1 pg~500 ng/10 μl
    特异性 RNA0.01 ng~500 ng/10 μl
    Nuclease-Free WaterTo 10 μl 
    2、轻轻吹打混匀反应体系后,将以上混合液在 37℃温育 2~5 min;
    3、65℃热失活 2 min,迅速将获得的 RNA 置于冰上,用于后续实验。长期保存请置于 -80℃,避免反复冻融。
    储存/保存方法
    -20 ℃保存,有效期24个月。
    注意事项
    1、若 RNA 样本下游用于 RT-PCR,且目的基因长度 ≥3 kb,失活步骤前需添加终浓度为 10 mM 的 DTT;
    2、为避免 RNA 降解,可在反应体系中加入适量的 RNase Inhibitor。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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