DNA Gel/PCR Purification Kit

本试剂盒采用特殊处理的硅胶膜和高效的溶胶体系，可简单、快速地从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收长度为50bp-15kb的高质量DNA片段。特殊处理的硅胶膜可以选择性地特异吸附高达8μg的DNA片段，但不吸附酶、矿物油和其它杂质，最后DNA片段可用Elution Buffer从Gel Recovery Column柱洗脱下来。回收率高达50-80%，回收的DNA片段可用于各种常规实验，例如酶切、连接、转化、PCR模板、测序和文库构建等。

使用建议：

如果所提质粒为低拷贝质粒或大10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5～10ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液EB应在65～70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。

产品组分：

组分名称	体积
Buffer CBS	15ml
Binding Solution	25ml
WA Solution	30ml
Wash Solution	12ml
Elution Buffer	10ml
ddH2O	10ml
Gel Recovery Column	50个
2ml Collection Tube	50个
1.5ml Collection Tube	50个

 

注意事项：

1. 回收长片段DNA或短片段时应适当增加待回收DNA样品量

2. 对于50bp-100bp之间的片段，可添加异丙醇增加小片段的回收率。

 

实验操作：
1. DNA吸附柱平衡处理：向Gel Recovery Column中加入200μl buffer CBS，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将Gel Recovery Column重新放回到收集管中。再向Gel Recovery Column中加入200μl的ddH2O，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。将Gel Recovery Column重新放回到收集管中。
注：请使用当天处理过的Gel Recovery Column
2. 从琼脂糖凝胶中切下含有目的片段的凝胶，估计重量或精确称量重量。每100mg 1%琼脂糖凝胶加入100μl Binding Solution，如更高的琼脂糖凝胶，Binding Solution呈比例增加。
3. 于50-60℃水浴5-10min，期间每2-3min间断轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。
注：对于400bp及以下片段，在溶胶后加入整个溶液0.5体积的异丙醇，可显著提高回收率。
4. 将上述混合液转移至套有2ml收集管的吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min，取出吸附柱，并倒掉收集管中废液。
5. 将吸附柱重新放回收集管中，加入500μl WA Solution，于12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
6. 将吸附柱重新放回收集管中，加入500μl Wash Solution，于12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
7. 重复步骤6一次。
8. 将吸附柱重新放回收集管中，12000rpm离心1min，打开吸附柱盖子，室温放置5-10min或50℃放置3-5min，以彻底去除Wash Solution。
9. 将吸附柱放入干净的1.5ml收集管中（试剂盒自带），对于膜中央悬空加入30-50μl Elution Buffer，盖好盖子，37℃放置2min，12000rpm离心1min，离心管中的液体即为包含目的基因的溶液。

该试剂盒在室温条件下，可保存12个月，更长时间保存可置于4℃。 若溶液产生沉淀，可在室温下放置一段时间，或在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。