产品描述 | |||||||||||||||||||||
描述 | 本试剂盒采用特殊处理的硅胶膜和高效的溶胶体系,可简单、快速地从TAE或TBE琼脂糖凝胶中回收长度为50bp-15kb的高质量DNA片段。特殊处理的硅胶膜可以选择性地特异吸附高达8μg的DNA片段,但不吸附酶、矿物油和其它杂质,最后DNA片段可用Elution Buffer从Gel Recovery Column柱洗脱下来。回收率高达50-80%,回收的DNA片段可用于各种常规实验,例如酶切、连接、转化、PCR模板、测序和文库构建等。 使用建议: 如果所提质粒为低拷贝质粒或大10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5~10ml过夜培养物,同时按照比例增加P1、P2、P3的用量,洗脱缓冲液EB应在65~70℃水浴预热,在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其它步骤相同。
注意事项: 1. 回收长片段DNA或短片段时应适当增加待回收DNA样品量 2. 对于50bp-100bp之间的片段,可添加异丙醇增加小片段的回收率。
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使用方法 | 实验操作: 1. DNA吸附柱平衡处理:向Gel Recovery Column中加入200μl buffer CBS,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将Gel Recovery Column重新放回到收集管中。再向Gel Recovery Column中加入200μl的ddH2O,12000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液。将Gel Recovery Column重新放回到收集管中。 注:请使用当天处理过的Gel Recovery Column 2. 从琼脂糖凝胶中切下含有目的片段的凝胶,估计重量或精确称量重量。每100mg 1%琼脂糖凝胶加入100μl Binding Solution,如更高的琼脂糖凝胶,Binding Solution呈比例增加。 3. 于50-60℃水浴5-10min,期间每2-3min间断轻微颠倒混匀,直至胶块完全融化。 注:对于400bp及以下片段,在溶胶后加入整个溶液0.5体积的异丙醇,可显著提高回收率。 4. 将上述混合液转移至套有2ml收集管的吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心1min,取出吸附柱,并倒掉收集管中废液。 5. 将吸附柱重新放回收集管中,加入500μl WA Solution,于12000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。 6. 将吸附柱重新放回收集管中,加入500μl Wash Solution,于12000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。 7. 重复步骤6一次。 8. 将吸附柱重新放回收集管中,12000rpm离心1min,打开吸附柱盖子,室温放置5-10min或50℃放置3-5min,以彻底去除Wash Solution。 9. 将吸附柱放入干净的1.5ml收集管中(试剂盒自带),对于膜中央悬空加入30-50μl Elution Buffer,盖好盖子,37℃放置2min,12000rpm离心1min,离心管中的液体即为包含目的基因的溶液。 | ||||||||||||||||||||
储存/保存方法 | 该试剂盒在室温条件下,可保存12个月,更长时间保存可置于4℃。 若溶液产生沉淀,可在室温下放置一段时间,或在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。 | ||||||||||||||||||||
注意事项 | 1、1. Wash Solution在使用前应按要求加入48ml无水乙醇,并做好标记,使用后及时盖紧瓶盖,防止乙醇挥发。 | ||||||||||||||||||||
温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究 |
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