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  • DiO 高氯酸盐

    • 3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐,DiO perchlorate,DiOC18(3);3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanineperchlorate
    货号: abs45153674
    CAS号: 34215-57-1
    分子式: C53H85ClN2O6
    分子量: 881.7
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    产品描述
    描述

            DiO 即 DiOC18(3),是最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现绿色荧光。DiO 是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiO 在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,被激发后可以发出绿色荧光,具有很高的淬灭常数和激发态寿命,可以用标准的 FITC 滤光片检测。
            DiO 作为示踪剂或长期示踪剂,被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织。DiO 通常不会显著影响细胞的生存力。
            DiO 除了细胞膜荧光标记外,还可用于检测细胞的融合和粘附,发育或移植过程中的细胞迁移,通过 FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
            DiO 染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。此外,在固定透化(室温下用 0.1% TritonX-100 透化)后,也可以很好地进行质膜染色。DiO 染色强度通常低于 DiI,有时在固定组织中会完全丧失。

    纯度
    95%
    使用方法
    1、染色液制备:
    (1)配置无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 储存液:储存液用无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 配置浓度 1~5 mM。DiO在DMSO和DMF中的溶解度比在EtOH中的溶解度高。
    注:①未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融。
           ②发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。
    (2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS 或 PBS)稀释储存液,配制浓度为 1~30 μM 的工作液。最常用的工作液浓度为 5-10 μM。
    注:工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。
    2、悬浮细胞染色:
    (1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
    (2)37℃ 孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
    (3)孵育结束,1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液,再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    (4)重复步骤(3)两次以上。
    3、贴壁细胞的染色:
    (1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    (2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但表面要保持湿润。
    (3)在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    (4)37℃ 孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
    (5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片 2~3 次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育 5~10 min,然后吸干培养基,但要使表面保持湿润。
    4、结果检测:
    样品可在培养基中进行检测,可以通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
    储存/保存方法
    4℃ 避光保存,有效期12个月。
    注意事项
    1、DiO 染色固定的细胞或组织样品时,样品宜使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液 会导致荧光背景较高。
    2、荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧 光淬灭。
    3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    基本信息
    别名
    3,3'-二-N-十八烷基氧代羰花青高氯酸盐;DiOC18(3);3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanineperchlorate
    外观
    黄色固体
    荧光
    λEx/λ Em(MeOH) = 484/501 nm
    可溶性/溶解性
    溶于无水乙醇、DMSO 和 DMF,在 DMSO 中的溶解度约为 10mg/ml。较难溶解时,可以适当加 热或者超声处理。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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