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  • 快速内切酶ClaI

    货号: abs60209
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    abs60209-50rxns 现货 ¥200.00
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    产品描述
    描述
    爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。爱必信的快速内切酶具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,爱必信生物去磷酸化、连接试剂在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
    识别位点:
    5'...A T ↓ C G A T ...3'
    3'...T A G C ↑ T A ...5'
    同裂酶:BspDI,BanIII,Bsa29I,BseCI,BshVI,BsiXI,Bsp106I,BspXI,Bsu15I,BsuTUI,ZhoI
    注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

    产品组分:

    名称规格
     ClaI50 μl
    10× Cut Buffer1 ml
    10× Cut Color Buffer1 ml
    使用方法

    1. DNA 快速酶切流程:
    ① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

     质粒 DNAPCR 产物基因组 DNA
    ddH2O15 μl16 μl30 μl
    10× Cut  Buffer 或 10× Cut  Color Buffer2 μl3 μl(a)5 μl
    底物 DNA2 μl (up to 1 μg)10 μl (~0.2 μg)10 μl (5 μg) 
    ClaI1 μl1 μl5 μl
    Total20 μl30 μl50 μl
    a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× Cut Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
    ② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
    ③ 37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA);
    ④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。
    2. 双酶切或多酶切:
    ① 每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系;
    ② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
    ③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
    3. 适用于质粒的扩大反应体系:
    DNA1 μg2 μg3μg4 μg5 μg
    ClaI1 μl2μl3 μl4 μl5 μl
    10× Cut  Buffer 或 10× Cut Color Buffer2 μl2 μl3 μl4 μl5 μl
    Total20 μl20 μl30 μl40 μl50 μl
    注:如果总反应体系大于 20 μl,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
    不同 DNA 中的酶切位点数量:
    λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
    150100022

    甲基化修饰影响:
    DamDcmCpGEcoKIEcoBI
    序列可能重叠剪切阻断无影响序列可能重叠剪切阻断无影响序列可能重叠剪切阻断

    在不同反应缓冲液中的活性:
     Cut BufferThermo Scientific
    FastDigest Buffer
    NEB
    CutSmart®
     Buffer
    Takara
    QuickCut™ Buffer
    活性100%100%100%100%
    储存/保存方法
    -20℃,有效期2年。
    技术指标
    建议的反应条件:
    1× Cut 缓冲液;
    37℃温育;
    参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
    失活条件:
    80℃温育 20 min。
    质量控制:
    功能活性检测:
    最适反应温度下,在 20 μl 反应体系中,1 μl  ClaI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA (Dam-)。
    超长时间温育检测:
    最适反应温度下,将 1 μl  ClaI 与 1 μg λDNA (Dam-)共同温育 3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
    酶切 - 连接 - 再酶切检测:
    最适反应温度下,使用 1 μl  ClaI 消化底物,回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
    非特异性内切酶活性检测:
    最适反应温度下,将 1 μl ClaI 与 1 μg 超螺旋质粒DNA 共同温育 4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
    蓝白斑检测:
    将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl BamHI 消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即 DNA 末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于 爱必信的系列限制酶而言,白色菌落比例应小于 1%。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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