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  • PI细胞周期与凋亡试剂盒
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  • 货号: abs50005
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    abs50005-50T 现货 ¥1000.00
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    产品描述
    描述

            本产品基于碘化丙啶(Propidium, PI)染色方法分析细胞周期 和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料,其嵌入双链DNA中可以 产生荧光,荧光的强度和双链DNA的量成正比。

            在正常细胞周期中,G0和G1期有1套染色体,G2和M期细胞 有2套染色体,S期介于两者之间。经PI染色后,处在不同细胞周 期中的细胞的荧光强度不同。假定G0和G1期的细胞荧光强度为 1,那么G2和M期的细胞的荧光强度为2,S期的细胞介于1和2之 间。

            细胞凋亡时,由于细胞核皱缩和DNA片段化,染色时DNA片 段会从打孔的细胞膜处丢失,流式细胞仪检测时,荧光强度小于 1,即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

            细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检 测。凋亡前期,染色质皱缩,细胞密度增加,前向角光散色显著 降低。凋亡后期,细胞产生凋亡小体,前向角光散射和侧向角光 散色都显著降低。

    产品组分:

    编号名称50T
    APropidium Iodide500 μl 
    BRNase A500 μl 
    CStaining Buffer25ml
    应用
    本产品用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测,也可用于组织细胞检测。
    使用方法
    自备耗材和设备:
    1 ml 移液器 100-200 μl 移液器
    旋窝混匀仪
    流式细胞仪
    PBS
    75%乙醇

    适用实验与操作过程:
    1、细胞准备
    贴壁细胞:弃细胞培养液,胰酶消化,制备单细胞悬液, 1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次 1000 g离心5分钟,弃上清。
    悬浮细胞:收集细胞悬液,1000 g离心5分钟,弃上清。沉淀 用1 ml预冷的PBS重悬。再次1000 g离心5分钟,弃上清。
    组织细胞:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后,用0.25%的 胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。 1000 g离心5分钟,弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬。再次 1000 g离心5分钟,弃上清。
    注意,最后一次离心,弃上清后留50 μl上清,涡旋混匀。
    2、细胞固定
    细胞沉淀用1 ml -20 ℃预冷的75%乙醇轻轻混匀,4℃固定2小 时以上或者过夜。然后,1000 g离心5分钟,轻轻弃上清,沉淀用1 ml预冷的PBS重悬,1000 g离心5分钟,弃上清。
    3、染色 PI染色工作液配置:
    0.5 ml染色缓冲液(C液)中加入10 μl PI 染液(A液)和10 μl RNase A(B液),混匀待用。每个细胞样品 加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,轻轻混匀重悬细胞。37℃,避 光孵育30分钟,直接上流式细胞仪检测(5小时内完成为佳)。激 发波长为488 nm,检测红色荧光。
    注意:每个检测细胞数不超过1×106个。
    注意事项
    1、PI具有毒性,操作时应注意防护,保护眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。
    2、PI存在淬灭现象,保存和使用过程中注意避光。
    基本信息
    别名
    PI细胞周期与凋亡试剂盒
    概述
    储存/保存方法
    -20 ℃避光保存,有效期12个月。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
        提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
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