封闭步骤的作用原理
时间：2019-10-02 点击次数：12008
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封闭作用的原理： 因为支持介质会非特异的结合某些蛋白，其中就包括你的一抗，封闭液可以与非特异位点结合，减少或几乎没有一抗的非特异性结合。一般可以选择BSA（abs9157）、脱脂奶粉（abs9174、abs9175）等。在免疫组化，免疫荧光实验中，使用二抗来源动物的血清效果会更好，尤其是在免疫荧光中。
抗体封闭液中包含有大量的蛋白质，可以和你的样品蛋白充分的结合；当你加上特异性抗体时，你的特异性抗体就会特异竞争性的和特异性的抗原结合，从而有效的避免抗体和非特异性的抗原结合而造成假阳性结果。一般的抗体封闭液是5%的脱脂奶粉或者BSA或者1-10%血清，最好的是二抗来源动物的血清。
封闭血清的原理主要有两点，第一是待检样本会非特异性的和蛋白结合，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
封闭血清的选择方法：
与二抗同一来源的，不能与一抗同一来源。血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。
二抗因尽量少选取兔子或老鼠来源的，因为这两个在亲缘关系上和人类非常接近，所以产生交叉反应的机会就比较大，从而导致背景比较高!适合选用来源于驴，山羊，绵羊等的二抗，背景相对就很低。
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