1. 3-MA 抑制的是哪个酶？

货号 abs810575 的 3-Methyladenine（别名 3-甲基腺嘌呤、3-MA、NSC 66389）是选择性 PI3K 抑制剂，对 Vps34（也就是 class III PI3K）IC50 为 25 µM，对 PI3Kγ 为 60 µM，CAS 5142-23-4，分子式 C6H7N5，分子量 149.15，纯度 ≥98%，白色至类白色粉末。对 Vps34 的偏好可能来自它特有的疏水环把 3-甲基这个基团包住。作用位点在自噬体成核那一环，所以它拦的是自噬泡生成，不是溶酶体降解。分子量很小、便宜，是领域内用得最久的自噬抑制剂之一。

2. 用它做自噬实验的三个陷阱？

第一，剂量窗口很窄且有时间依赖。HeLa 细胞 2.5 或 5 mM 处理 1 天不影响活力，但 10 mM 处理 1 天活力下降 25.0%；处理 2 天时 2.5、5、10 mM 分别让活力下降 11.5%、38.0% 与 79.4%。第二，LC3-II 下降不代表自噬被抑制到位，3-MA 会让 LC3-I 上升、LC3-II 下降，12 到 48 小时之间都在变，采样点要卡准。第三，长时间处理反而诱导 LC3-I 到 LC3-II 转换，结论会相反。

3. 读点该怎么配才站得住？

稳妥的读点组合是 GFP-LC3 puncta 计数加 p62 蛋白水平，加一条 ATG7 依赖性验证：3-MA 诱导的 LC3 转换与游离 GFP 释放依赖 ATG7。5 mM 处理后缺葡萄糖 HeLa 细胞里带 GFP-LC3 puncta 的比例降到 23%。要强调 p62 的解读——3-MA 会明显升高 p62，在 Atg5 缺失 MEF 里也一样，说明这部分升高与自噬降解能力无关，不能把 p62 升高直接写成自噬增强。

4. 溶解与规格怎么备？

溶解有两种口径：水 5 mg/mL（33.52 mM），DMSO 3 mg/mL 需温热（20.11 mM），按质量浓度配即可，用水配更省事。储存：粉末 -20℃ 三年，2-4℃ 两周，溶解后 -20℃ 六个月。规格 25 mg 现货、50 mg 1-2 周、200 mg 2-3 天、500 mg 1-2 周。体内方向：蛛网膜下腔出血模型里 3-MA 预处理显著加重神经症状，这是抑制自噬使病情恶化的反向证据，做保护性实验时结论方向不要照搬。

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