Western Blot实验试剂配置-爱必信(absin)官网

Western Blot实验试剂配置

时间：2016-06-29 点击次数：4921

扫一扫

(一)母液
【1.5mol/L Tris·HCl(pH8.8)】
Tris(MW121.14)	45.43g
超纯水	200ml
溶解后，用浓盐酸调整PH至8.8,最后用超纯水定容至250ml,高温灭菌后室温下保存

【1.0mol/L Tris·HCl】
Tris(MW121.14)	30.29g
蒸馏水	200ml
溶解后，用浓盐酸调整pH至所需点，最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温保存

【 0.5mol/L Tris·HCl】
Tris(MW121.14)	15.14g
超纯水	200ml
溶解后，用浓盐酸调整pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，高温灭菌后室温保存。

【1.74mg/ml(10mmol/L)PMSF】
PMSF	0.174g
异丙醇	100ml
溶解后，分装与1.5ml离心管中，-20℃保存

【 0.2mol/LNaH2PO4 】
NaH2PO4(MW119.98)	12g
蒸馏水至	500ml
溶解后，高压灭菌，室温保存

【 0.2mol/LNaH2PO4】
NaH2PO4·12H2O(MW358.14)	71.6g
蒸馏水至	1000ml
溶解后，高温灭菌，室温保存。

【10%SDS】
SDS	10g
蒸馏水至	100ml
50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。

【10%过硫酸胺（AP）】
过硫酸胺	0.1g
超纯水	1.0ml
溶解后，4℃保存。保存时间为一周。

【40%Acr、Bic（37.5:1）】
丙烯酰胺（Acr）	37.5g
甲叉双丙烯酰胺（Bic）	1g
超纯水至	100ml
37℃下溶解后，4℃ 保存。使用时恢复至室温至无沉淀。

【 20%Tween20】
Tween20	20ml
蒸馏水至	100ml
混匀后4℃保存

（二）使用液
单去污剂裂解液（50mmol/L Tris·HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100mg/ml PMSF）：
1mol/L Tris·HCl（pH8.0）		2.5ml
NaCl		0.438g
TritonX－100		0.5ml
蒸馏水至		50ml
混匀后， 4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100mg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF 50μl）。

【0.01mol/L PBS（ pH 7.2-7.4）】
0.2 mol/L NaH2PO4		19ml
0.2 mol/L Na2HPO4		81ml
NaCl		17g
蒸馏水至		2000ml

【 G250考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量专用）】
考马斯亮蓝G250		100mg
95％乙醇		50ml
磷酸		100ml
蒸馏水至		1000ml
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。

【0.15 mol/L NaCl】
NaCl（MW58.44）		0.877g
蒸馏水至		100 ml
高温灭菌后，室温保存。

【100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）】
BSA		0.1g
0.15 mol/L NaCl		1ml
溶解后，－20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，－20℃保存。

【 10％分离胶和4％浓缩校】
	10％分离胶（两块胶，10ml）		4％浓缩胶（两块胶，5ml）
超纯水	4.85ml		3.16ml
40％Acr/Bic（37.5：1）	2.5ml		0.5ml
1.5 mol/L Tris·HCl（pH8.8）	2.5ml		－
0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8）	－		1.26ml
10%SDS	100 μl		50 μl
10%AP（过硫酸胺）	50 μl		25 μl
TEMED	5μl		5 μl
加TEMED后，立即混匀即可灌胶。

【还原型5XSDS上样缓冲液（0.25mol/L Tris·HCl pH6.8，0.5mol/L二硫叔糖醇，10％SDS，0.5％溴酚蓝，50％甘油）】
0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8）		2.5ml
二硫叔糖醇（DTT，MW154.5）		0.39g
SDS		0.5g
溴酚蓝		0.025
甘油		2.5ml
混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存。

【电泳液缓冲液（25mmol/L Tris，0.25mol/L甘氨酸，0.1％ SDS）】
Tris（MW121.14）		3.03g
甘氨酸（MW75.07）		18.77g
SDS		1g
蒸馏水至		1000ml
溶解后室温保存，次溶液可重复使用3～5次。

【转移缓冲液（48mmol/L Tris，39mmol/L甘氨酸，0.037％ SDS，20％甲醇）】
甘氨酸（MW75.07）		2.9g
Tris（MW121.14）		5.8g
SDS		0.37g
甲醇		200ml
蒸馏水至		1000ml
溶解后室温保存，次溶液可重复使用3～5次。

【 10X丽春红染液】
丽春红S		2g
三氯乙酸		30g
磺基水杨酸		30g
蒸馏水至		100ml
使用时将其稀释10倍。

【TBS缓冲液（100mmol/ L Tris·HCl pH7.5,150mmol/L NaCl）】
1 mol/ LTris·HCl（pH7.5）		10ml
NaCl		8.8g
蒸馏水至		1000ml

【TBST缓冲液（含0.05％Tween20的TBS缓冲液）】
20％Tween20		1.65ml
TBS		700ml
混匀后即可使用，最好现用现配。

*【1TBST 1L】**
Tris base		2.422g (MW121.4)
Nacl		8.775g
Tween20		0.5ml

【封闭液（含5％脱脂奶粉的TBST缓冲液）】
脱脂奶粉		5g
TBST		100ml
溶解后4℃保存。使用时，恢复室温，用量以盖过膜面即可，一次性使用。

【洗脱抗体缓冲液（100mmol/L 2-Mercaptoethanol，2％SDS，62.5m mol/L Tris·HCl pH6.8）】
14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(β-巯基乙醇)		700 ml（通风厨里加）
SDS		2g
0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8）		12.5ml
超纯水至		100ml
配制时，在通风厨内进行。4℃保存。可重复使用1次。

【显影液（5X）】
自来水（加热至50℃）		375ml （以下药品加到温水中）
米吐尔		1.55g
亚硫酸钠（无水）		22.5g
碳酸钠（无水）		33.75g
溴化钾		20.95g
补水至		500ml
配制时，上述药品应逐一加入，待一种试剂溶解后，再加入后一种试剂。4℃保存。使用时用自来水稀释至1倍。

【定影液】
自来水（50～60℃）		700ml
（以下药品按顺序加入前者溶解后再加后者）
硫代硫酸钠		240g
亚硫酸钠（无水）		15g
冰乙酸		12.6ml
硼酸		7.5g
钾明矾		15g（水温冷至30℃以下时再加入）
加水定容至1000ml，室温保存

爱必信(上海)生物科技有限公司

Absin产品线：

爆款产品：十大试剂盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、生化检测、残留检测、多因子检测)；细胞培养(类器官试剂盒+基质胶，胎牛血清+培养添加剂+细胞因子)、分化试剂盒；分子(mRNA合成服务+提取试剂盒)；化合物大包装；辅助试剂、耗材/仪器、定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

特色产品：鸡胚提取物CEE、B27、N2、霍乱毒素B亚单位CTB、牛脑垂体提取物BPE、百日咳毒素PTX、重组人胰岛素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

爱必信(上海)生物科技有限公司

联系邮箱：info@absin.cn

微信公众号：爱必信生物