抗体亲和纯化填料解决方案
作者:爱必信高级产品经理 时间:2025-02-10 点击次数:497
一、背景介绍
◆ 蛋白A是⾦⻩⾊葡萄球菌的细胞壁中的表⾯蛋⽩,它由折叠成三螺旋束的五个同源Ig结合域组成;
◆ 蛋白G是G、C型链球菌细胞壁中的⼀种蛋⽩质;
◆ 蛋白A/G是重组蛋⽩A蛋⽩G融合蛋⽩,融合了来⾃蛋⽩A的5个Fc结合域和蛋⽩G的3个Fc结合域;
◆ 蛋白L来源于⼤消化链球菌,并通过L链相互作⽤与免疫球蛋⽩结合。

图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域
表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析
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蛋白A |
蛋白G |
蛋白A/G |
蛋白L |
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优点 |
结合位点在CH2和CH3结构域之间的Fc区域,以及⼈ VH3家族的Fab区内的重链
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可以特异性地同免疫球蛋⽩IgG分⼦的Fc段结合⽽不影响其Fab段与抗原分⼦结合的能⼒ |
可以与⼈的所有IgG亚型、IgA、IgE、IgM结合。蛋⽩A/G降低了对pH的依赖,允许在pH 5-8进⾏结合 |
只与抗体的κ轻链结合⽽不会影响抗体的抗原结合位点。可以结合更⼴泛的抗体类别,如⼈类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD,以及含κ轻链(⼈类1,3,4型,⼩⿏1型)的Fab、scFv等抗体⽚段 |
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缺点 |
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不能与⼩⿏的IgA、IgM和⾎清⽩蛋⽩结合 |
不结合⽜、⼭⽺或绵⽺来源的免疫球蛋⽩ |
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应用 |
免疫球蛋⽩的纯化、固定或检测领域 |
从⾎清中分离并纯化或去除IgG、单克隆抗体的纯化和抗原抗体复合物的分离等 |
⿏IgG单抗的提取和检测 |
从添加BSA或FCS的培养液中纯化单克隆抗体,也⼴泛⽤于基因改造⼯程化抗体的纯化分离 |
表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和⼒
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种类 |
亚型 |
蛋白A |
蛋白G |
蛋白A/G |
蛋白L |
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人 |
IgG1 |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
IgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
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IgG3 |
+ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
|
IgG4 |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
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IgM |
+ |
- |
+ |
+++ |
|
|
IgD |
- |
- |
- |
+++ |
|
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IgA |
+ |
- |
+ |
+++ |
|
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Fab |
+ |
+ |
+ |
+++ |
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小鼠 |
IgG1 |
+ |
++ |
++ |
+++ |
|
IgG2a |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
|
IgG2b |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
|
IgG3 |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
|
IgM |
- |
- |
- |
+++ |
|
|
大鼠 |
IgG1 |
+ |
++ |
++ |
+++ |
|
IgG2a |
- |
+++ |
+++ |
+++ |
|
|
IgG2b |
- |
+ |
+ |
+++ |
|
|
IgG2c |
+++ |
+++ |
+++ |
+++ |
|
|
牛 |
IgG1 |
+ |
+++ |
+++ |
- |
|
IgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
- |
|
|
山羊 |
IgG1 |
+ |
+++ |
+++ |
- |
|
IgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
- |
|
|
马 |
IgG(ab) |
+ |
- |
+ |
NA |
|
IgG(c) |
+ |
- |
+ |
NA |
|
|
IgG(T) |
- |
+++ |
+++ |
NA |
|
|
兔 |
IgG |
+++ |
+++ |
+++ |
+ |
|
猪 |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
+++ |
|
狗 |
IgG |
+++ |
+ |
+++ |
NA |
|
鸡 |
IgY |
- |
- |
- |
- |
注:- 表示不包含;+ 表示中标组合;+++ 表示错误组合;NA 表示不适用或数据不可用。
二、抗体亲和纯化填料参数
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类别 |
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF |
重组蛋白G琼脂糖凝胶FF |
重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF |
蛋白A/G琼脂糖凝胶FF |
重组蛋白L琼脂糖凝胶FF |
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基质 |
4%交联琼脂糖 |
4%交联琼脂糖 |
4%交联琼脂糖 |
4%交联琼脂糖 |
4%交联琼脂糖 |
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配基 |
重组金黄色葡萄球菌蛋白A,≥6mg/mL |
重组链球菌蛋白G,≥6mg/mL,单点偶联 |
重组耐碱蛋白A,≥6mg/mL |
蛋白A蛋白G融合蛋白,≥6mg/mL |
重组大消化链球菌蛋白L,≥6 mg/mL |
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粒径范围a |
45-165μm |
||||
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平均粒径 |
~90μm |
||||
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动态结合载量b |
≥40mg h-IgG/mL |
≥40mg h-IgG/mL |
≥45mg h-IgG/mL |
≥40mg h-IgG/mL |
≥40mg k轻链h-IgG/mL |
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推荐工作流速c |
60-300cm/h |
60-300cm/h |
60-300cm/h |
60-150cm/h |
60-300cm/h |
|
最大流速与压力d |
>900cm/h |
||||
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使用 pH |
3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定) |
3-9(推荐的工作pH),2-10(短期稳定) |
3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定) |
3-10(推荐的工作pH),3-12(短期稳定) |
2-9(推荐的工作pH),15mM NaOH(CIP) |
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化学稳定性 |
在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。 |
在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70%乙醇。 |
在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6 mol/L盐酸胍、70%乙醇等。 |
在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、0.1-0.5mol/L氢氧化钠、6mol/L 盐酸胍、70%乙醇等。 |
在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、6mol/L盐酸胍、70% 乙醇。 |
注:
a:90%体积以上的微球在此粒径范围;
b:DBC10%测试条件为:10%流穿,6min停留时间;
c:推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下2-6min停留时间的使用条件,并非只能在该流速范围内工作;
d:10cm柱高下的最大测试流速。
三、应用数据

图2 工艺溶剂稳定性

图3 不同蛋⽩A填料对NaOH的耐受性

图4 不同蛋⽩G填料的洗脱曲线,样品为h-IgG

图5 填料:重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)(Cat: abs91003-M);
样品:牛血清,相对于填料约20mg IgG/mL填料;
上样、结合缓冲液: 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV;
洗脱缓冲液:100mM甘氨酸,pH3.0,14CV;
在位清洗(CIP):100mM NaOH,10CV
四、爱必信抗体亲和纯化填料产品信息
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货号 |
产品名称 |
规格 |
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重组蛋白A琼脂糖凝胶FF |
10mL/100mL |
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重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱) |
1mL/5mL |
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重组蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱) |
1mL/5mL |
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重组蛋白G琼脂糖凝胶FF |
10mL/100mL |
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重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱) |
1mL/5mL |
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重组蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱) |
1mL/5mL |
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重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF |
10mL/100mL |
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重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱) |
1mL/5mL |
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重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(重力预装柱) |
1mL/5mL |
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蛋白A/G琼脂糖凝胶FF |
10mL/100mL |
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蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱) |
1mL/5mL |
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蛋白A/G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱) |
1mL/5mL |
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易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF |
10mL/100mL |
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易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(中压预装柱) |
1mL/5mL |
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易洗脱蛋白G琼脂糖凝胶FF(重力预装柱) |
1mL/5mL |
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重组蛋白L琼脂糖凝胶FF |
10mL/100mL |
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重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(中压预装柱) |
1mL/5mL |
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重组蛋白L琼脂糖凝胶FF(重力预装柱) |
1mL/5mL |
参考文献
[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.










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