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  • Annexin V-FITC apoptosis assay kit
  • Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
  • 货号: abs50001
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs50001-25T 现货 ¥630.00
    - +
    abs50001-50T 现货 ¥1050.00
    - +
    abs50001-100T 现货 ¥1838.00
    - +
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    产品描述
    描述

    在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

    产品组分
    25 Tests 50 Tests 100 Tests
    AnnexinV-FITC 125μl250μl500μl
    10×Binding Buffer1.5ml2.5ml6.5ml
    Propidium Iodide125μl250μl500μl
    操作步骤
    贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2%的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时,注意必须彻底清除EDTA:在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤,清除EDTA,以免残余的EDTA与Ca2+螯合,影响Annexin V的结合。
    (1) 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer;
    (2) 细胞收集:悬浮细胞收集:离心 5 分钟;贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后( 注:胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合),在室温中,2000rpm 离心 5~10 分钟,收集细胞;
    (3) 细胞洗涤:用预冷 1×PBS(4℃)重悬细胞一次,2000rpm 离心 5~10分钟,弃上清洗涤细胞;
    (4) 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞;
    (5) Annexin V-FITC 标记:加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后,避光,室温孵育 15 分钟;
    (6) PI 标记:上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
    (7) 上机前,补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
    操作说明
    (1) 使用前低速离心,以免液体积存管盖和管壁;
    (2) 本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
    (3) PI(propidium iodide,溴化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
    (4) Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
    (5) 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在 4℃下操作,以免影响细胞状态。
    (6) 在细胞洗涤的最后一步,请尽量将上清弃净,以免 PBS 残留,有可能会影响实验结果。
    (7) 为防止荧光衰变,宜在 1 小时内进行流式检测。
    (8) PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC 染色,最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
    基本信息
    别名
    Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒
    概述
    储存/保存方法
    4℃保存6个月;避免反复冻融。
    温馨提示:本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究
        提示: 尊敬的客户您好,如果您对我们的产品有什么疑问或想要了解的,可以点击“我要提问”按钮填写您的疑问。
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    • 有哪些注意事项
    • 1. 由于凋亡检测的为活细胞,因此整个收集细胞的操作过程尽量保持细胞活性,避免人为损伤细胞, 如:避免用力吹打细胞,避免胰酶消化时间过长,用冰浴的PBS清洗细胞,缩短上机检测的时间。 2. Annexin-V染料上带FITC荧光,因此从染色开始注意避光操作和孵育,一般尽量在染色后半个小时内 上机检测。 3. 如果处理的细胞中含有GFP会干扰FITC的荧光信号,应该更换不同波长的荧光染料标记的Annexin-V。 4. 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin-V结合, 从而干扰实验结果。 5. 在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin-V与PS的结合,若胞内已转染GFP, 建议使用AnnexinV-PE。 6. 如果样本来源为贴壁细胞,建议使用Accutase酶。 7. 建议细胞密度为1-5*106/ml,为保证实验结果,最佳细胞密度需自行摸索。

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