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  • Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

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    • Annexin V-FITC apoptosis assay kit
    货号： abs50001
    产品说明书
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    货号-规格 货期 价格 数量
    abs50001-25T 1-2周 ￥630.00 ￥378.00
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    abs50001-50T 现货 ￥1050.00 ￥630.00
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    abs50001-100T 现货 ￥1838.00 ￥1103.00
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    产品描述
    描述

    在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

    产品组分
    25 Tests 50 Tests 100 Tests
    AnnexinV-FITC 125μl250μl500μl
    10×Binding Buffer1.5ml2.5ml6.5ml
    Propidium Iodide125μl250μl500μl
    操作步骤
    贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2+螯合，影响Annexin V的结合。
    （1） 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer；
    （2） 细胞收集：悬浮细胞收集：离心 5 分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（ 注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合），在室温中，2000rpm 离心 5～10 分钟，收集细胞；
    （3） 细胞洗涤：用预冷 1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm 离心 5～10分钟，弃上清洗涤细胞；
    （4） 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞；
    （5） Annexin V-FITC 标记：加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后，避光，室温孵育 15 分钟；
    （6） PI 标记：上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
    （7） 上机前，补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
    注意：每个反应体系建议细胞数为1×104至1×106个
    操作说明
    （1） 使用前低速离心，以免液体积存管盖和管壁；
    （2） 本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
    （3） PI（propidium iodide，溴化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
    （4） Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
    （5） 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在 4℃下操作，以免影响细胞状态。
    （6） 在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免 PBS 残留，有可能会影响实验结果。
    （7） 为防止荧光衰变，宜在 1 小时内进行流式检测。
    （8） PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC 染色，最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
    基本信息
    别名
    Annexin V-FITC apoptosis assay kit
    储存/保存方法
    4℃保存6个月；避免反复冻融。
    温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究
    • 实验方法 实验条件
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      • 问 有哪些注意事项
      • 答 1. 由于凋亡检测的为活细胞，因此整个收集细胞的操作过程尽量保持细胞活性，避免人为损伤细胞， 如：避免用力吹打细胞，避免胰酶消化时间过长，用冰浴的PBS清洗细胞，缩短上机检测的时间。 2. Annexin-V染料上带FITC荧光，因此从染色开始注意避光操作和孵育，一般尽量在染色后半个小时内 上机检测。 3. 如果处理的细胞中含有GFP会干扰FITC的荧光信号，应该更换不同波长的荧光染料标记的Annexin-V。 4. 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板，因为血小板含有PS，能与Annexin-V结合， 从而干扰实验结果。 5. 在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin-V与PS的结合，若胞内已转染GFP， 建议使用AnnexinV-PE。 6. 如果样本来源为贴壁细胞，建议使用Accutase酶。 7. 建议细胞密度为1-5*106/ml，为保证实验结果，最佳细胞密度需自行摸索。
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        阿地力江·萨吾提; 周文婷; 艾尼瓦尔·吾买尔

        中国临床药理学杂志. 2020 Dec 28 ; 中国临床药理学杂志,2020,36(24):4013-4017.

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