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CCK-8试剂盒
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  • CCK-8试剂盒

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      • 问 CCK-8的细胞毒性如何？
      • 答 CCK-8毒性非常低，因此CCK-8检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法，中性红染色法或DNA荧光染色法。
      • 问 CCK-8会对活细胞进行染色吗？
      • 答 不会，首先WST-8不会进入细胞染色，整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分，反应结束更换新的培养液，即可清除外源组分。
      • 问 做细胞活性检测时，每孔应该接种多少个细胞？
      • 答 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。
      • 问 若是使用6孔或者24孔板进行试验，CCK-8试剂使用量怎么样呢？
      • 答 如果要使用6孔板或24孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
      • 问 培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢？
      • 答 不会的，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不会对检测造成影响。
      • 问 能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢？
      • 答 可以，CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍，然后加入培养基总体积的20%即可，这样可减少误差。
      • 问 只可以在450nm波长处测OD值吗？
      • 答 可以在450nm波长处测OD值，但是若无此波长的滤光片，可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
      • 问 若是暂不检测OD值，该如何处理？
      • 答 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
      • 问 在加入CCK-8时可否不更换培养基？
      • 答 一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其它培养基。
      • 问 在实验中OD值太高，怎么解决？
      • 答 可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外，可适当减少细胞的数量。
      • 问 如果OD值太低，怎么解决？
      • 答 可以采取2个办法：1、适当增加细胞数量 2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。
      • 问 应该每次做标准曲线吗？
      • 答 建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。
      • 问 有时在药物作用情况下，细胞已经死亡，但是脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？
      • 答 能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量。
      • 问 CCK-8的是什么颜色？
      • 答 CCK-8正常颜色为粉红色，若颜色发生明显偏差，质量可能有发生变化。
      • 问 悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？
      • 答 悬浮细胞由于显色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞显色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。
      • 问 CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？
      • 答 不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
      • 问 在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？
      • 答 可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。
      • 问 如何设定空白对照？
      • 答 在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
      • 问 CCK-8能否检测细菌细胞？
      • 答 可以检测E.coli，但不能检测酵母细胞。向100 μl E.coli培养液中加入10 μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。
      • 问 CCK-8的保存和稳定性如何？
      • 答 CCK-8稳定性高，避光条件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存，避免反复冻融。

      Certificate of Analysis(COA)

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