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内参信息对照表(点击内参名可查看产品)

内参 样品类型 分子量(kDa)
beta-actin 全细胞/细胞质 43
GAPDH 全细胞/细胞质 30-40
tubulin 全细胞/细胞质 55
VDCA1/膜孔蛋白 线粒体 31
COXIV 线粒体 16
核纤层蛋白B1 细胞核 66
TATA结合蛋白TBP 细胞核 38


在Western Bloting实验中,内参即是内部参照(Internal Control)也叫作Loading contorl,对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。


在Western Blotting 中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。


常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH、beta-actin和beta-tubulin等。对于一些植物的样本,则需要特别的植物Actin蛋白作为内参,同样的,如果提取的样本是细胞核蛋白,那么PCNA或者组蛋白H3都是被经常使用的,而针对一些研究线粒体的客户,那么Cox IV则被较多的文献引用作为线粒体总蛋白的内部参考。

标签抗体

 FLAG
 
 HA
 
 His
 
 V5
 
 GST
 
 Myc
 
 agrose偶联


标签抗体,别名为抗原表位,又称抗原决定簇,是抗原分子中决定抗原特异性的特殊区域或基团,是与抗体特异性结合的结构或序列。随着生物技术的发展,科研人员可以通过DNA重组技术,构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白,进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化,以达到研究的需求。


融合标签根据其相对分子质量大小可以分为两大类:大的蛋白质分子和小的多肽片段。融合标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。